[發明專利]用于治療疾病的三環DNA反義寡核苷酸、組合物和方法

在審

• 申請號: 201811113867.2
• 申請日: 2010-04-09
• 公開（公告）號: CN109576268A
• 公開（公告）日: 2019-04-05
• 發明（設計）人: 丹尼爾·舒佩利;克里斯蒂安·盧曼;丹尼斯·弗靈;路易斯·加西亞;托馬斯·沃伊特
• 申請（專利權）人: 肌肉學研究協會;索邦大學;伯爾尼大學;法國國家科學研究中心
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/11;A61K31/711;A61K31/712;A61P21/00;A61P19/08
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司 11219
• 代理人: 楊青;穆德駿

本發明涉及用于治療疾病的三環DNA反義寡核苷酸、組合物和方法，更具體而言，本發明提供了三環DNA(tc?DNA)AON以及利用tc?DNA AON調節pre?mRNA加工期間發生的剪接事件的方法。tc?DNA AON可用于在pre?mRNA加工期間促進外顯子跳躍或掩蔽內含子沉默序列和/或末端莖?環序列，并引導RNase介導的加工后mRNA的破壞。本文描述的Tc?DNA AON，通過跳過肌養蛋白基因內突變的外顯子23或51以恢復肌養蛋白的功能性，可用于杜氏肌營養不良的治療方法；通過掩蔽SMN2基因中的內含子沉默序列和/或末端莖?環序列，能夠至少部分補充無功能SMN1蛋白，從而用于脊髓性肌萎縮的治療方法；并且通過引導對包含3’?末端CUG重復序列的突變DM1 mRNA的破壞，可用于Steinert肌強直性營養不良的治療方法。

本申請為國際申請日2010年4月9日、國際申請號PCT/EP2010/054735于2011年11月22日進入中國國家階段、申請號201080022376.2、發明名稱“用于治療疾病的三環DNA反義寡核苷酸、組合物和方法”的分案申請。

發明背景

技術領域

總的來說，本公開涉及合成的反義寡核苷酸(AON)，以及使用反義寡核苷酸改變在pre-mRNA加工期間發生的剪接事件、或下調含有重復序列例如3’或5’CUG、CAG和/或CCUG的突變mRNA的表達的方法。更具體來說，本文公開了三環DNA(tc-DNA)AON，其能夠有效促進pre-mRNA加工期間的外顯子跳躍、掩蔽pre-mRNA中的內含子沉默序列和/或莖-環序列、以及引導RNase介導的mRNA破壞。本文描述了這樣的tc-DNA AON，通過跳過肌養蛋白基因內突變的外顯子、例如突變的外顯子23或外顯子51以恢復肌養蛋白的功能性，可用于杜氏肌營養不良(Duchenne Muscular Dystrophy)的治療方法中。還描述了這樣的tc-DNA AON，其通過掩蔽SMN2基因內的內含子沉默序列和/或末端莖-環序列，以產生能夠至少部分補償無功能SMN1蛋白、包含由外顯子7編碼的氨基酸序列的修飾的功能性SMN2蛋白，從而可用于脊髓性肌萎縮的治療方法中。此外本文還描述了這樣的tc-DNA AON，其通過引導對包含3’-末端CUG重復序列的突變DM1mRNA的破壞，可用于Steinert肌強直性營養不良的治療方法中。因此，tc-DNA AON以及一種或多種上述方法可用于恢復與肌病相關的蛋白的功能性。

背景技術

杜氏肌營養不良(DMD)是最常見的遺傳性肌病，3,500名男性中約有1人患有此病，與種族無關。盡管不太常見，在顯性攜帶者中，女孩和婦女也可表現出類似杜氏肌營養不良的癥狀。DMD的最主要后果是肌纖維變得特別脆，并且自然的肌肉活動就會激起肌肉組織的普遍損傷。在DMD以及許多肌營養不良中觀察到的終點，是緩慢退化導致幾乎完全纖維變性并伴有脂肪浸潤。由于脊柱變形和呼吸困難，在1960年代時的預期壽命約為15歲。在不存在心臟并發癥的情況下，現代在管理方法上的改進(即關節固定術和氣管切開術通氣)已經將預期壽命提高至30歲。

DMD的臨床癥狀在18個月至三歲時變得明顯，包括行走和爬行能力滯后、難以從地板上起立和小腿肚異常增大。在約5至6歲時，在足、膝和髖關節中發生肌肉收縮。疾病發展的特征是持續性肌肉消耗，導致在約9至12歲時喪失行走能力。此外，一些杜氏肌營養不良男孩表現出智力遲鈍，表明缺失的蛋白也與中樞神經系統有關。

杜氏肌營養不良是X染色體連鎖的隱性病。1986年，通過定位克隆方法鑒定到DMD基因座位于X染色體上(Xp21.2–OMIMid：310200)，在編碼被稱為肌養蛋白的蛋白的基因中。肌養蛋白基因中的突變導致在橫紋肌中不能產生肌養蛋白。患病男孩的母親有三分之二的幾率攜帶肌養蛋白突變，而接近三分之一的雙親具有新生突變。一半以上的DMD男孩表現出涵蓋一至幾個外顯子的大基因組缺失；他們中極少數具有大的序列重復。其他人具有難以鑒定的點突變或非常小的缺失或重復。