[發(fā)明專利]一種提高外源蛋白表達量的蛋白合成體系及其應(yīng)用方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201811113130.0 | 申請日： | 2018-09-25 |
| 公開（公告）號： | CN110938649A | 公開（公告）日： | 2020-03-31 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 郭敏;丁曉輝;劉顯成;楊寧;王紹杰;董穎穎;王靜;代田純;于雪 | 申請（專利權(quán)）人： | 康碼（上海）生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/81 | 分類號： | C12N15/81;C12N15/67 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 201321 上海市*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 提高 蛋白 表達 合成 體系 及其 應(yīng)用 方法 | ||
1.一種提高外源蛋白的表達量的體外蛋白合成體系，所述合成體系至少包括細胞裂解產(chǎn)物，所述細胞裂解產(chǎn)物來自于基因工程細胞，所述基因工程細胞的基因序列中整合有在編碼eIF4E結(jié)合蛋白的核苷酸序列前插入強啟動子序列構(gòu)建的多核苷酸序列；且該合成體系中不添加或額外添加eIF4E結(jié)合蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成體系，其特征在于：所述強啟動子序列選自GAPDH1、HXK1、PGK1、TEF1、TIF1、ADH1、SED1之一或其組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的合成體系，其特征在于：所述強啟動子序列選自pScGAPDH1、pKlHXK1、pKlPGK1、pScPGK1、pScSED1、pScADH1、pKlGAPDH1之一或其組合。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3的任意一項所述的合成體系，其特征在于：所述的eIF4E結(jié)合蛋白為Eap1p、p20、4E-BP1、4E-BP2、PHAS-I的一種或其組合。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3的任意一項所述的合成體系，其特征在于：所述細胞為真核細胞。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的合成體系，其特征在于：所述真核細胞為哺乳動物細胞、植物細胞、酵母細胞、昆蟲細胞之一或其任意組合。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的合成體系，其特征在于：酵母選自釀酒酵母、克魯維酵母屬酵母之一或其組合。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的合成體系，其特征在于：所述克魯維酵母屬酵母選自乳酸克魯維酵母、馬克斯克魯維酵母、多布克魯維酵母之一或其任意組合。
9.一種體外合成蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
(i)提供一蛋白合成體系，其中所述的合成體系為權(quán)利要求1-8的任一合成體系；和
(ii)在適合表達蛋白的條件下，在編碼所述外源蛋白的DNA或RNA模板存在下，孵育所述體外蛋白合成體系，從而表達所述的外源蛋白。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的體外蛋白合成方法，其特征在于，所述方法還包括：(iii)分離或檢測所述外源蛋白。
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