[發明專利]通過多條sgRNA共注射實現同一基因有效敲除有效
| 申請號: | 201811113109.0 | 申請日: | 2018-09-25 |
| 公開(公告)號: | CN109234316B | 公開(公告)日: | 2021-02-09 |
| 發明(設計)人: | 黃行許;王新;賈堃 | 申請(專利權)人: | 肇慶華夏凱奇生物技術有限公司 |
| 主分類號: | C12N15/90 | 分類號: | C12N15/90;C12N15/89;C12N9/22 |
| 代理公司: | 北京迎碩知識產權代理事務所(普通合伙) 11512 | 代理人: | 張群峰;錢揚保 |
| 地址: | 526238 廣東省肇慶市*** | 國省代碼: | 廣東;44 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 通過 sgrna 注射 實現 同一 基因 有效 | ||
1.一種小鼠
選定待敲除基因的編碼區的兩個19~21bp -NGG目標序列,使其分別包含完整的目標密碼子CAA或CAG ,其中的目標單堿基C位于目標序列的第4-8位,目標密碼子與NGG間隔12-14bp;
利用兩個sgRNA序列來將BE3定位到相應的目標序列以使目標密碼子中的目標單堿基C變成T從而相應引入終止密碼子TAA或TAG以實現基因敲除;
所述兩個sgRNA序列為分別與兩個目標序列互補對應的19~21bp序列,分別為:
Sg-1: aaaa
Sg-2: cggttt
其中所述兩個sgRNA被共注射以實現同一基因的有效敲除,
其中BE3為 rAPOBEC-SpCas9-NLS-UGI-NLS。
2.權利要求1所述方法在細胞系N2a進行鼠
3.根據權利要求1所述方法在小鼠胚胎細胞進行鼠
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