[發明專利]一種提取長根菇基因組DNA的試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201811102162.0
• 申請日: 2018-09-20
• 公開（公告）號: CN109055362A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 劉朋虎;張煜隆;黃在興;胡應平;羅海凌;蘇德偉;李晶;翁伯琦;林占熺
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種提取長根菇基因組DNA的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的組成包括：

（1）平衡液，包含以下組成成分：1% Na₂SiO₃·9H₂O，1% NaOH；

（2）裂解液，包含以下組成成分：5.0M鹽酸胍，25%異丙醇和1%PVP K30；

（3）洗滌液，包含以下組成成分：20 mM NaCl，20 mM Tris-HCl，85%乙醇，pH 7.5；

（4）洗脫液，包含以下組成成分：10 mM Tris-HCl，pH 8.5；

（5）DNA吸附柱。

2.根據權利要求1所述的一種提取長根菇基因組DNA的試劑盒，其特征在于，所述DNA吸附柱為硅酸鋁陶瓷纖維膜DNA吸附柱。

3.一種利用權利要求1或2所述試劑盒提取長根菇基因組DNA的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）向DNA吸附柱中加平衡液200 μL，室溫10,000 rpm離心1 min，棄廢液，對DNA吸附柱進行預處理；

（2）將2-50 mg樣品研磨后加入裂解液600 μl，混勻，室溫 10,000 rpm，離心30 s；

（3）將上清轉移到處理過的DNA吸附柱，室溫10,000 rpm離心1 min，棄廢液；

（4）向DNA吸附柱中加入洗滌液600 μl，室溫10,000 rpm離心1 min，棄廢液后將DNA吸附柱套回廢液收集管，室溫10,000 rpm，離心1 min；

（5）將DNA吸附柱移到新的1.5 mL EP管中，開蓋放置1-2 min去除乙醇殘留，加入65℃預熱的洗脫液30-100μl，靜置1-2 min；或在其中加入20 μg/ mL 的RNA酶，37℃孵育30min，去除RNA；

（6）室溫12,000 rpm離心2 min，洗脫DNA，保存備用。

4.根據權利要求3所述的一種提取長根菇基因組DNA的方法，其特征在于，步驟（5）中的洗脫液，65℃預熱。

5.如權利要求1 所述的一種提取長根菇基因組DNA的試劑盒在食用菌基因組DNA提取及ITS分子生物學鑒定中的應用。