[發明專利]一種重組傳染性造血器官壞死病毒及其構建方法與應用

有效

• 申請號: 201811100029.1
• 申請日: 2018-09-20
• 公開（公告）號: CN109136200B
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 趙景壯;徐黎明;盧彤巖
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黑龍江水產研究所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;A61K39/295;A61K39/205;A61K39/12;A61P31/14
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;張立娜

本發明公開了一種重組傳染性造血器官壞死病毒及其構建方法與應用。本發明所提供的重組傳染性造血器官壞死病毒與改造前的傳染性造血器官壞死病毒相比，差別僅在于在所述改造前的傳染性造血器官壞死病毒的基因組RNA中的P基因和M基因之間還含有目的蛋白的編碼基因(如傳染性胰臟壞死病毒的VP2基因)。本發明以IHNV為親本病毒，利用反向遺傳操作技術體外拯救成功獲得了能夠表達傳染性胰臟壞死病毒VP2基因的重組病毒rIHNV?VP2。本發明所構建得到的重組病毒rIHNV?VP2，通過系列試驗證明了該重組病毒能夠起到同時防治IHNV和IPNV的作用，本發明為進一步開展IHNV和IPNV的防治研究奠定了堅實的基礎。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種重組傳染性造血器官壞死病毒及其構建方法與應用。

背景技術

傳染性造血器官壞死病(Infectious hematopoietic necrosis,IHN)和傳染性胰臟壞死病(Infectious pancreatic necrosis,IPN)是最常見的、嚴重危害鮭鱒魚健康的病毒性傳染病，是目前造成世界范圍內鮭鱒魚產業重大經濟損失的最主要的兩種疾病。傳染性造血器官壞死病毒(Infectious haematopoietic necrosis virus，IHNV)，屬于彈狀病毒科(Rhabdoviridae)，諾拉彈狀病毒屬(Novirhabdovirus)，為單股負鏈RNA病毒，其病毒基因組全長約為11kb，包含六個基因，分別編碼病毒核蛋白(N)、磷蛋白(P)、基質蛋白(M)、糖蛋白(G)、非結構蛋白(NV)和聚合酶蛋白(L)。根據G蛋白基因序列可將世界范圍內的IHNV分為U、M、L、E和J五種基因型。其中，U、M、L基因型主要流行于北美，E基因型流行于歐洲，J基因型流行于亞洲。根據致病毒株、環境因素、魚齡的不同，IHNV可造成鮭鱒魚高達100％的死亡率，是目前嚴重阻礙鮭鱒魚健康可持續發展的頭號殺手。傳染性胰臟壞死病毒(Infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)屬于雙片段RNA病毒科的水生雙RNA病毒屬。IPNV基因組由兩條雙鏈RNA組成(A片段和B片段)，A片段全長3092bp，編碼106kDa多聚蛋白(NH2-VP2-VP4-VP3-COOH)，其中VP2和VP3是該病毒的兩種主要結構蛋白，VP2是誘導保護性中和抗體的主要免疫原。B片段全長2777bp，編碼蛋白pVP1(94kDa)，是病毒粒子依賴的RNA聚合酶。由于毒株、宿主及環境因素的不同，IPNV可造成10％～90％死亡率。IHN和IPN主要危害魚苗和幼魚階段的虹鱒(Onchorhyncus mykiss)、美洲紅點鮭(Salvelinusfontinalis)、褐鱒(Salmo trutta)、大西洋鮭(Salmo salar)和大麻哈屬(Oncorhynchusspp.)的魚苗及幼魚，是目前嚴重阻礙鮭鱒魚健康可持續發展的主要病毒性傳染病。

與經典的從表型改變到進行基因特征研究的思路相反，反向遺傳操作技術(reverse genetics)是指通過構建RNA病毒的感染性分子克隆，在病毒cDNA分子水平上對其進行體外人工操作(如進行基因點突變、缺失、插入、顛換、轉位和互補等改造)，改變病毒的某些特征(如減低病毒的毒力，提高病毒的侵染力等等)，將病毒的cDNA分子連入表達載體，轉染細胞獲得病毒的感染性克隆，也被稱為“病毒拯救”(the rescue of virus)。通過反向遺傳操作技術可以研究RNA病毒的基因復制與表達調控機理、RNA編輯和自發重組與誘導重組、病毒與宿主間的相互作用關系、抗病毒策略、基因治療研究，以及構建新型病毒載體來表達外源基因和進行疫苗的研制等。

發明內容

本發明的目的是提供一種重組傳染性造血器官壞死病毒及其構建方法與應用。

第一方面，本發明要求保護一種重組傳染性造血器官壞死病毒。

本發明所提供的重組傳染性造血器官壞死病毒與改造前的傳染性造血器官壞死病毒相比，差別僅在于在所述改造前的傳染性造血器官壞死病毒的基因組RNA中的P基因和M基因之間還含有目的蛋白的編碼基因。