[發明專利]一種重組傳染性造血器官壞死病毒及其構建方法與應用

有效

• 申請號: 201811100029.1
• 申請日: 2018-09-20
• 公開（公告）號: CN109136200B
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 趙景壯;徐黎明;盧彤巖
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黑龍江水產研究所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;A61K39/295;A61K39/205;A61K39/12;A61P31/14
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;張立娜

1.重組傳染性造血器官壞死病毒，其特征在于：所述重組傳染性造血器官壞死病毒與改造前的傳染性造血器官壞死病毒相比，差別僅在于在所述重組傳染性造血器官壞死病毒的基因組RNA中的P基因和M基因之間還含有目的蛋白的編碼基因；

所述目的蛋白的編碼基因為靶標病毒的抗原基因；

所述靶標病毒的抗原基因為傳染性胰臟壞死病毒的VP2基因；

所述改造前的傳染性造血器官壞死病毒為傳染性造血器官壞死病毒BLk94株。

2.根據權利要求1所述的重組傳染性造血器官壞死病毒，其特征在于：所述傳染性胰臟壞死病毒為傳染性胰臟壞死病毒ChRtm213株。

3.根據權利要求1所述的重組傳染性造血器官壞死病毒，其特征在于：所述改造前的傳染性造血器官壞死病毒的基因組RNA中的所述P基因編碼SEQ ID No.1所示的磷蛋白。

4.根據權利要求1所述的重組傳染性造血器官壞死病毒，其特征在于：所述改造前的傳染性造血器官壞死病毒的基因組RNA中的所述M基因編碼SEQ ID No.2所示的基質蛋白。

5.根據權利要求2所述的重組傳染性造血器官壞死病毒，其特征在于：所述傳染性胰臟壞死病毒的VP2基因編碼SEQ ID No.3所示的VP2蛋白。

6.根據權利要求3所述的重組傳染性造血器官壞死病毒，其特征在于：所述改造前的傳染性造血器官壞死病毒的基因組RNA中的所述P基因的編碼區的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

7.根據權利要求4所述的重組傳染性造血器官壞死病毒，其特征在于：所述改造前的傳染性造血器官壞死病毒的基因組RNA中的所述M基因的編碼區的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。

8.根據權利要求5所述的重組傳染性造血器官壞死病毒，其特征在于：所述傳染性胰臟壞死病毒的VP2基因的編碼區的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。

9.根據權利要求1所述的重組傳染性造血器官壞死病毒，其特征在于：所述重組傳染性造血器官壞死病毒與所述改造前的傳染性造血器官壞死病毒相比，差別僅在于將所述改造前的傳染性造血器官壞死病毒的基因組RNA中位于所述P基因的編碼區和所述M基因的編碼區之間的A片段替換為了片段B；所述片段A的序列為SEQ ID No.7；所述片段B的序列為SEQID No.8。

10.一種制備權利要求1-9中任一所述的重組傳染性造血器官壞死病毒的方法，包括如下步驟：將含有所述重組傳染性造血器官壞死病毒的基因組RNA對應的cDNA序列的重組質粒和輔助質粒共轉染EPC細胞，從而獲得所述重組傳染性造血器官壞死病毒。

11.根據權利要求10所述的方法，其特征在于：所述含有所述重組傳染性造血器官壞死病毒的基因組RNA對應的cDNA序列的重組質粒中啟動所述重組傳染性造血器官壞死病毒的基因組RNA對應的cDNA序列表達的啟動子為T7啟動子。

12.根據權利要求10所述的方法，其特征在于：所述輔助質粒共有4個：含有所述改造前的傳染性造血器官壞死病毒的基因組RNA中N基因的編碼區對應的cDNA序列的輔助質粒1；含有所述改造前的傳染性造血器官壞死病毒的基因組RNA中P基因的編碼區對應的cDNA序列的輔助質粒2；含有所述改造前的傳染性造血器官壞死病毒的基因組RNA中NV基因的編碼區對應的cDNA序列的輔助質粒3；含有所述改造前的傳染性造血器官壞死病毒的基因組RNA中L基因的編碼區對應的cDNA序列的輔助質粒4。