[發明專利]一種霉菌和酵母計數測試片、制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201811099187.X
• 申請日: 2018-09-20
• 公開（公告）號: CN109182445B
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發明（設計）人: 陳萍;劉桐;任大勇;徐琳琳;董娜;劉爽;修琳;畢云楓;崔雯雯;鄭慧紋
• 申請（專利權）人: 吉林農業大學
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06
• 代理公司: 長春吉大專利代理有限責任公司 22201
• 代理人: 劉世純;王恩遠

一種霉菌和酵母計數測試片、制備方法及其在檢測食品中霉菌和酵母計數方面的應用，屬于食品檢測技術領域。該測試片從上至下依次由帶有粘性下表面的透明塑料上層膜、帶有鏤空區域的塑料中層板、印刷有方格的底板組成；以上材料耐高溫的溫度范圍為130℃～150℃；透明塑料上層膜的粘性下表面涂覆有復配冷水可溶性凝膠，在鏤空區域填充有形狀與鏤空區域相同的浸漬有霉菌和酵母計數顯色檢測培養基的滅菌無紡布。本發明使用該種測試片進行食品中霉菌和酵母計數測定，培養基組分能夠加快霉菌孢子和酵母菌增殖與菌落形成，并抑制霉菌菌絲蔓延生長，解決了霉菌菌絲擴散生長和酵母菌生長慢導致的菌落覆蓋、計數準確性差和所需時間長的技術難題。

技術領域

本發明屬于食品檢測技術領域，具體涉及一種霉菌和酵母計數測試片、制備方法及其在檢測食品中霉菌和酵母計數方面的應用。

背景技術

霉菌和酵母計數測定指標是反映食品衛生質量的重要指標，用來判定食品被污染的程度。霉菌和酵母計數測定是我國飲料、堅果制品、米面制品、糕點類等食品的檢測指標，也是食品風險預測和危害評估的重要監測項目。目前GB4789.15《食品安全國家標準食品微生物學檢驗霉菌和酵母計數》采用霉菌和酵母平板計數法，該方法需要進行培養基配制、滅菌、玻璃器皿清洗等工作，程序繁瑣，工作量大。微生物測試片類檢測產品計數便捷，使用起來只需要樣品制備、增殖培養和計數步驟，省去了配制培養基、消毒滅菌和培養器皿的清洗處理等大量輔助性工作，是國內外進行微生物污染計數測定最好的檢測產品。

現有商業化微生物測試片檢測產品中，美國3M公司的Petrifilm^TM測試片在世界各地應用廣泛，國內北京陸橋科技有限公司等多家企業也相繼推出系列國產測試片產品，還有一些測試片處于研發和小范圍使用階段。雖然這些測試片具有方便實用的突出優勢，但霉菌和酵母計數測試片尚存在一些關鍵技術瓶頸需解決。突出問題集中在三個方面：即霉菌菌絲蔓延生長影響計數甚至導致無法計數，霉菌菌落顯色顏色深覆蓋酵母菌，造成計數結果偏差大；酵母菌生長慢、菌落小，檢測周期長；菌落顯色不能指示所有霉菌和酵母菌，需要完善，防止漏檢。本發明針對上述存在問題研制了霉菌和酵母菌計數測試片，采用兩種特異性酶底物顯色方法，即脂肪酶的特異性顯色底物棕櫚酸對硝基苯酯和堿性磷酸酯酶的特異性顯色底物5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸酯；添加了顯色促進因子乙醇、硫酸銅、氯化鈣、氯化鋅，加快菌落顯色，縮短測試片檢測時間；通過硫酸鎂、磷酸二氫鉀和硫酸鐵等無機鹽的聯合使用，控制霉菌菌絲蔓延生長，使菌落大小適中，霉菌和酵母菌均呈色清晰、計數準確。

發明內容

本發明的目的之一在于提供一種操作簡單、價格低廉、檢測準確的霉菌和酵母計數測試片，該測試片從上至下依次由帶有粘性下表面的透明塑料上層膜(如透明度高、無毒無刺激性氣味、防水透氣的PET硅膠膜，厚度為0.05mm～0.10mm，PET硅膠膜的下表面自身帶有粘性)、帶有鏤空區域的塑料中層板(如硬度較好的聚丙烯(PP)塑料板或PET塑料板，厚度為0.15mm～0.30mm)、印刷有方格的底板(如防水、防滲透的白色銅版紙，厚度為0.10mm～0.20mm；方格的尺寸范圍是1cm～2cm×1cm～2cm)組成；以上材料耐高溫的溫度范圍為130℃～150℃；透明塑料上層膜的粘性下表面涂覆有復配冷水(溫度范圍是20℃～45℃)可溶性凝膠，塑料中層板的鏤空區域為圓形、橢圓形或方形結構，鏤空區域面積與塑料中層板面積的比例范圍為1：1.6～2.7，在鏤空區域填充有形狀與鏤空區域相同的浸漬有霉菌和酵母計數顯色檢測培養基的滅菌無紡布。

復配冷水可溶性凝膠組分為：將經研磨后過100～150目標準篩的聚丙烯酸鈉和瓜爾膠混合，按聚丙烯酸鈉和瓜爾膠的重量和100％計算，聚丙烯酸鈉的重量百分含量為15～25％，其余為瓜爾膠。