[發(fā)明專利]用于硫嘌呤類藥物的用藥相關(guān)基因分型試劑盒和分型方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201811098669.3
• 申請日: 2018-09-20
• 公開（公告）號: CN109486932A
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周連群;李金澤;張芷齊;李傳宇;姚佳;張威;郭振
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6886;C12Q1/6858
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11250
• 代理人: 李敏

1.一種用于硫嘌呤類藥物的用藥相關(guān)基因分型試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括核酸擴增試劑、基于硫嘌呤類藥物的個體化用藥相關(guān)基因設(shè)計的引物和熒光探針，所述核酸擴增試劑包括納米二氧化硅。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述納米二氧化硅的粒徑為50～500nm。優(yōu)選的，所述納米二氧化硅為球狀。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述核酸擴增試劑中還包括DNA聚合酶、dNTPs、擴增緩沖液和非離子型表面活性劑中的至少一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的試劑盒，其特征在于，所述核酸擴增試劑，包括如下濃度的成分：

Taq酶，100～500mg/L；

dNTPs，50～200g/L；

Tris-HCl，0.5～2mL/L；

MgCl₂，10～40g/L；

KCl，5～20g/L；

(NH₄)₂SO₄，5～40g/L；

納米二氧化硅，20～100g/L；

Triton X-100，1～5mL/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的試劑盒，其特征在于，所述引物或熒光探針的濃度為100～300mg/L。優(yōu)選的，所述引物或熒光探針的濃度為200mg/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項所述的試劑盒，其特征在于，所述引物和熒光探針是基于TPMT基因的rs1142345位點和NUDT15基因的rs116855232位點中的至少一種設(shè)計的。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項所述的試劑盒，其特征在于，基于TPMT基因的rs1142345位點設(shè)計的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1-2所示，熒光探針的核苷酸序列如SEQ ID NO：3-4所示；

基于NUDT15基因的rs116855232位點設(shè)計的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：5-6所示，熒光探針的核苷酸序列如SEQ ID NO：7-8所示。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項所述的試劑盒，其特征在于，還包括核酸提取試劑，所述核酸提取試劑包括紅細胞裂解液，所述細胞裂解液包括溶液A和溶液B，所述溶液A為甲酸濃度為1～5mL/L的水溶液，溶液B為含碳酸鈉4～8g/L、氯化鈉10～20g/L和硫酸鈉25～40g/L的水溶液；和/或，

所述核酸提取試劑包括核酸釋放液，所述核酸釋放液包括蛋白酶K濃度為10～40g/L、RNase濃度為5～20g/L、EDTA濃度為5～20g/L的水溶液。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項所述的試劑盒在硫嘌呤類藥物的個體化用藥相關(guān)基因分型中的應(yīng)用。

10.一種利用權(quán)利要求1-9任一項所述的試劑盒進行硫嘌呤類藥物的用藥相關(guān)基因分型的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、向待測血液中加入紅細胞裂解液的溶液A，震蕩混合，然后再加入紅細胞裂解液的溶液B，震蕩混合，隨后進行離心、棄上清，重懸細胞；重復(fù)以上裂解步驟至少一次，得到細胞裂解液；

S2、向細胞裂解液中加入核酸釋放液，在63-67℃下處理5-10分鐘，然后在100-120℃下處理30-60秒，得到核酸樣本；

S3、以步驟S2中獲得的核酸樣本為模板，加至核酸擴增試劑、引物和熒光探針的預(yù)混液中，進行實時熒光定量PCR檢測。

優(yōu)選的，在S3步驟中，實時熒光定量PCR的反應(yīng)程序為：熱啟動，95℃保持5分鐘；熱循環(huán)，循環(huán)40次，每循環(huán)為95℃保持15秒；最后58～62℃保持30秒。