[發(fā)明專利]APPV-E2融合蛋白及其制備方法、應(yīng)用和疫苗

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811096568.2
• 申請日: 2018-09-19
• 公開（公告）號: CN109053904B
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 賀筍;任立松;李延濤;任郭子君
• 申請（專利權(quán)）人: 天康生物股份有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K16/10;C12N15/62;C12N15/85;A61K39/12;A61P31/14;G01N33/569
• 代理公司: 北京超凡志成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11371
• 代理人: 周宇

本發(fā)明提供了一種APPV?E2融合蛋白及其制備方法、應(yīng)用和疫苗，涉及生物技術(shù)領(lǐng)域。該APPV?E2融合蛋白將非典型豬瘟病毒的E2基因中抗原性好，易高表達的區(qū)域進行串聯(lián)，包括主要由SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列表達的區(qū)段A和主要由SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列表達的區(qū)段B，該APPV?E2融合蛋白具有抗原性好，表達量高的優(yōu)點。該APPV?E2融合蛋白可應(yīng)用于制備疫苗、抗體和用于檢測非典型豬瘟病毒的試劑盒。包含該APPV?E2融合蛋白的疫苗具有較好的免疫原性，免疫動物后可以產(chǎn)生較高滴度的抗體，使動物獲得較好的保護效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種APPV-E2融合蛋白及其制備方法、應(yīng)用和疫苗。

背景技術(shù)

豬瘟(hog cholera，HC)，又稱古典豬瘟(Classical Swine Fever，CSF)，是由豬瘟病毒(HCV，CSFV)引起的一種高度接觸性傳染病，由于造成的經(jīng)濟損失巨大，是受世界各國關(guān)注的傳染病之一，至今仍然是我國發(fā)病最多、危害最大、流行最廣的豬傳染病之一。

隨著對豬瘟免疫防御的工作開展，尤其在規(guī)模化豬場對豬瘟的疫苗接種取得了明顯的效果，典型性豬瘟發(fā)明日益減少。但是近年來，由于帶豬瘟病毒母豬的存在、流行毒株發(fā)生較大的變異、動物無需流動、疫苗質(zhì)量不穩(wěn)定、免疫程序不合理及各種干擾因素的影響，我國出現(xiàn)非典型豬瘟，并呈擴散的趨勢，而且出現(xiàn)繼發(fā)感染的趨勢也更加普遍，嚴重損害了經(jīng)濟效益。

非典型豬瘟在發(fā)病特點上表現(xiàn)為散發(fā)性流行，病程較長。臨床癥狀不典型，主要表現(xiàn)消化道癥狀，在沒有繼發(fā)感染的情況下體溫一般正常，在38.5℃-39.5℃；食量明顯下降，病程稍長者流口水，拉黃色稀糞，漸進性消瘦，后期衰竭死亡，病理特征不明顯；仔豬易出現(xiàn)震顫情況，斷奶前死亡率達到30％左右。給養(yǎng)殖戶造成巨大損失，目前尚無有效方法進行預(yù)防。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一目的在于提供一種APPV-E2融合蛋白，該APPV-E2融合蛋白串聯(lián)了APPV的E2基因的抗原表位，具有較好的免疫原性。

本發(fā)明的第二目的在于提供一種上述APPV-E2融合蛋白的制備方法，該制備方可以表達出上述APPV-E2融合蛋白。

本發(fā)明的第三目的在于提供上述APPV-E2融合蛋白、上述APPV-E2融合蛋白的制備方法或上述APPV-E2融合蛋白制備方法制備得到的融合蛋白的應(yīng)用，可應(yīng)用于制備疫苗、抗體和病毒檢測等多個方面。

本發(fā)明的第四目的在于提供一種包含上述APPV-E2融合蛋白的疫苗，該疫苗免疫原性好，保護效力高。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明特采用如下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種APPV-E2融合蛋白，包括區(qū)段A和區(qū)段B：所述區(qū)段A主要由SEQID NO.1所示的核苷酸序列表達，所述區(qū)段B主要由SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列表達。

優(yōu)選地，區(qū)段A和區(qū)段B的排列順序為A-B，通過Linker連接；

優(yōu)選地，所述Linker具有如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

優(yōu)選地，所述融合蛋白具有如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。

優(yōu)選地，所述APPV-E2融合蛋白的N端和/或C端連接有標(biāo)簽。

本發(fā)明還提供了一種上述APPV-E2融合蛋白的制備方法，包括將所述APPV-E2融合蛋白的基因在宿主中表達；

優(yōu)選地，使用哺乳動物表達系統(tǒng)表達所述APPV-E2融合蛋白的基因；

優(yōu)選地，使用CHO細胞表達系統(tǒng)表達所述APPV-E2融合蛋白的基因。