[發(fā)明專利]APPV-E2融合蛋白及其制備方法、應(yīng)用和疫苗有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201811096568.2 | 申請(qǐng)日： | 2018-09-19 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN109053904B | 公開（公告）日： | 2020-07-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 賀筍;任立松;李延濤;任郭子君 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 天康生物股份有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C07K19/00 | 分類號(hào)： | C07K19/00;C07K16/10;C12N15/62;C12N15/85;A61K39/12;A61P31/14;G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 周宇 |
| 地址： | 830000 新疆維吾爾自治區(qū)*** | 國(guó)省代碼： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | appv e2 融合 蛋白 及其 制備 方法 應(yīng)用 疫苗 | ||
1.一種APPV-E2融合蛋白，其特征在于，包括區(qū)段A和區(qū)段B：所述區(qū)段A的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述區(qū)段B的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
區(qū)段A和區(qū)段B的排列順序?yàn)锳-B，通過(guò)Linker連接；所述Linker的核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的APPV-E2融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的APPV-E2融合蛋白，其特征在于，所述APPV-E2融合蛋白的N端和/或C端連接有標(biāo)簽。
4.一種權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的APPV-E2融合蛋白的制備方法，其特征在于，包括：將所述APPV-E2融合蛋白的基因在宿主中表達(dá)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，使用哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)所述APPV-E2融合蛋白的基因。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，使用CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)所述APPV-E2融合蛋白的基因。
7.根據(jù)權(quán)利要求4-6任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，提供包含表達(dá)所述APPV-E2融合蛋白的基因的表達(dá)載體，將所述表達(dá)載體導(dǎo)入CHO細(xì)胞中，然后對(duì)CHO細(xì)胞進(jìn)行加壓篩選，再將加壓篩選出的CHO細(xì)胞馴化成懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞株，使所述懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞株表達(dá)所述APPV-E2融合蛋白。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，使用谷氨酰胺合成酶篩選擴(kuò)增系統(tǒng)篩選表達(dá)所述APPV-E2融合蛋白的CHO細(xì)胞株。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述谷氨酰胺合成酶篩選擴(kuò)增系統(tǒng)中使用的表達(dá)載體為pcDNA3、pEE6.4或pEE12.4。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，采用逐漸馴化的方法傳代至少6代獲得懸浮培養(yǎng)的表達(dá)所述APPV-E2融合蛋白的CHO細(xì)胞株。
11.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的APPV-E2融合蛋白或權(quán)利要求4-10任一項(xiàng)所述的制備方法的應(yīng)用，其特征在于，包括如下(x1)-(x5)中的至少一種：
(x1)制備非典型豬瘟疫苗；
(x2)制備非典型豬瘟病毒的抗體；
(x3)制備非典型豬瘟病毒診斷抗原；
(x4)制備檢測(cè)非典型豬瘟病毒的試劑和/或試劑盒；
(x5)制備檢測(cè)非典型豬瘟病毒抗體的試劑和/或試劑盒。
12.一種包含權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的APPV-E2融合蛋白的疫苗。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗中所述融合蛋白的濃度為100-200μg/ml。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗中所述融合蛋白的濃度為120-180μg/ml。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗中所述融合蛋白的濃度為150μg/ml。
16.根據(jù)權(quán)利要求12所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗還包括輔料，所述輔料包括疫苗佐劑、穩(wěn)定劑和抗生素中的一種或多種。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗佐劑包括氫氧化鋁膠、弗氏完全佐劑、弗氏不完全佐劑、白油佐劑、MF59佐劑或Montanide ISA系列佐劑。
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