[發明專利]一種膠紅酵母中蝦青素提取及分離純化的方法

有效

• 申請號: 201811096521.6
• 申請日: 2018-09-19
• 公開（公告）號: CN109053520B
• 公開（公告）日: 2020-09-01
• 發明（設計）人: 徐春厚;劉穎;謝為天;康愷;葛葉
• 申請（專利權）人: 廣東海洋大學
• 主分類號: C07C403/24
• 分類號: C07C403/24
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 劉瑤云;陳偉斌

本發明公開了一種膠紅酵母中蝦青素提取及分離純化的方法。該方法包括以下步驟：S1.采用酸熱法將膠紅酵母干菌體細胞破壁后，離心，棄上清液，洗滌，加入浸提液，于45～55℃提取2～4次，得到蝦青素粗提液；S2.向蝦青素粗提液中加入KOH醇溶液，在4～50℃黑暗條件下皂化20 min～7 h后，得到皂化后的蝦青素提取液；S3.將蝦青素提取液上樣至硅膠柱層析中，以流動相進行梯度洗脫，分離得到蝦青素成品。本發明通過對破壁方法、浸提溶劑、皂化方法及提取條件改進，獲得的蝦青素得率高、純度高，而且在提高分離速度的同時，有利于減少蝦青素在破壁和皂化過程中的破壞，生理活性好，可實現工業化生產。

技術領域

本發明屬于微生物活性成分提取分離技術領域。更具體地，涉及一種膠紅酵母中蝦青素提取及分離純化的方法。

背景技術

蝦青素是一種普遍存在于自然界的天然類胡蘿卜素，具有抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、抗炎癥、提高免疫力、呈色及促進生長等多種作用，并能預防糖尿病、心血管和神經退行性疾病。該物質現已廣泛應用于食品、保健品、藥品、化妝品、飼料及養殖業等行業，美國等國家已允許將其作為動物和魚飼料中的食物色素使用，市場前景廣闊。

目前，國際上對蝦青素需求量很大。蝦青素的來源主要有兩種，一種是化學合成，另一種是生物提取，生物提取的原料主要有水產品廢棄物、雨生紅球藻、和紅發夫酵母發酵物等。然而，水產品廢棄物中的蝦青素含量低，提取條件要求苛刻，生產成本高，產量少；雨生紅球藻自養培養周期長，技術水平要求較高，生產工藝較復雜；紅發夫酵母細胞內蝦青素的生物合成受發酵條件的影響較大，發酵成本較高，提取產量較低。另外，目前生物提取的方法主要有超臨界CO₂萃取法、化學溶劑提取法等，通過生物提取得到的粗提物，再進行皂化、分離純化。目前分離純化的方法主要為柱層析方法，柱層析的方法中根據固定相的不同，分為正相柱層析法與反相柱層析法，正相柱層析主要以硅膠作為固定相的填料，采用二氯甲烷-正己烷作為流動相，進行柱層析；反相柱層析主要以鍵合硅膠C18作為填料，采用甲醇-水作為流動相，進行柱層析。經過上述方法提取可得到純度約為80％～90％的蝦青素。

但是，由于現有提取分離方法的破壁、提取和分離工藝的限制，其制備得到的蝦青素得率低、純度低(≤90％)，而且這些技術，有些因為高壓、減壓、低溫技術而大大增加分離純化的成本，有些則因為采用高溫、使用易殘留有機溶劑等降低了蝦青素的活性。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服上述現有技術的不足，提供一種膠紅酵母中蝦青素提取及分離純化的方法。該方法操作簡便、高效，獲得的蝦青素得率高、純度高，同時有利于減少對蝦青素結構的破壞，生理活性好，可以進行大規模提取，容易實現工業化生產。

本發明的目的是提供一種膠紅酵母中蝦青素提取及分離純化的方法。

本發明上述目的通過以下技術方案實現：

一種膠紅酵母中蝦青素提取及分離純化的方法，包括以下步驟：

S1.采用酸熱法將膠紅酵母干菌體細胞破壁后，離心，棄上清液，洗滌，加入浸提液，于45～55℃提取2～4次，得到蝦青素粗提液；其中所述浸提液為丙酮溶液，或者為乙酸乙酯與乙醇的混合液，或者為乙腈與甲醇的混合液；

S2.向蝦青素粗提液中加入KOH醇溶液，在4～50℃黑暗條件下皂化20min～7h后，得到皂化后的蝦青素提取液；

S3.將蝦青素提取液上樣至硅膠柱層析中，以流動相進行梯度洗脫，分離得到蝦青素成品；其中，所述流動相選自正己烷、二氯甲烷、丙酮、石油醚或乙酸乙酯中的一種或幾種。

優選地，步驟S3中，所述流動相為正己烷、石油醚與乙酸乙酯的混合液，所述正己烷、石油醚與乙酸乙酯的體積比為5～7:1～2:1～2；或者所述流動相為正己烷與丙酮的混合液，所述正己烷與丙酮的體積比為2～7:1～3。