[發明專利]一種H7亞型禽流感病毒檢測方法

在審

• 申請號: 201811095713.5
• 申請日: 2018-09-19
• 公開（公告）號: CN109112231A
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發明（設計）人: 王楷宬;王素春;黃保續
• 申請（專利權）人: 中國動物衛生與流行病學中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種檢測H7亞型禽流感病毒的引物對和探針組，其特征在于，所述的引物對和探針序列信息如下：

正向引物：

5′-CCTATGATCACAGYAAATACAGGGAAGAGGCAAT-3′；

反向引物：

5′-CTAGAAGTATGAAACATGATGCCCCGAAGCTAA-3′；

探針H7probe：

5′-CCGAAGCTAAACCAAAGTATCACATCCTTTHFTAGCCGCTGCTTAGTTTGAC-3′。

2.如權利要求1所述的引物對和探針組，其特征在于，所述的探針自5′端起第29位堿基標記FAM發光基團，第29位堿基后連接脫堿基位點四氫呋喃THF，第30位堿基標記BHQ1淬滅基團，3′端進行C3-spacer阻斷修飾。

3.權利要求1所述的引物對和探針組在制備用于檢測H7亞型禽流感病毒的制品中的應用。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述的制品為逆轉錄重組酶介導等溫擴增檢測試劑盒。

5.一種逆轉錄重組酶介導等溫擴增檢測試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒中使用了權利要求1所述的引物對和探針組。

6.一種檢測臨床樣品中H7亞型禽流感病毒的檢測方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步驟：

1)配制RT-RAA反應體系

總體系50μL，含有反應緩沖液25μL，10pmol/μL H7 forward和H7 reverse各2.1μL，10pmol/μL H7 probe 0.6μL，RNase Free dH2O 15.7μL，醋酸鎂2.5μL，RT熒光基礎反應單元，待檢測的樣品RNA模板2μL；

2)RT-RAA反應體系擴增

將檢測反應條件設置為：在39℃下恒溫擴增20min；

3)結果判定

質控標準:陰性對照無擴增曲線，且陽性對照出現擴增曲線，則實驗數據有效，否則實驗結果視為無效；

結果描述及判定:無擴增曲線，樣品判為陰性；出現擴增曲線，樣品判為陽性。