[發明專利]檢測蓮草直胸跳甲CP基因表達特性的引物及其方法

有效

• 申請號: 201811095254.0
• 申請日: 2018-09-19
• 公開（公告）號: CN109022598B
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發明（設計）人: 張烜華;陳武星;曾華;林荔
• 申請（專利權）人: 張烜華
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

本發明提供了檢測蓮草直胸跳甲CP基因表達特性的引物及其方法，引物包含兩對，其序列如SEQ ID NO.1?4所示，利用所述引物建立了蓮草直胸跳甲雌雄蟲取食不同CO₂濃度培育的空心蓮子草后CP基因表達量檢測的熒光定量PCR法，并進行了轉錄組的測序，對CP基因熒光定量的表達量趨勢與轉錄組的表達量趨勢做了比較，為研究蓮草直胸跳甲受到環境脅迫時產生的防御機制及CP基因表達特性奠定了基礎。

技術領域

本發明涉及檢測蓮草直胸跳甲CP基因表達特性的引物及其方法，屬于生物技術領域。

背景技術

蓮草直胸跳甲屬鞘翅目，葉甲科，是空心蓮子草的主要生防天敵之一。GeorgeVogt于1962年首次發現了蓮草直胸跳甲對空心蓮子草有很好的控制作用。其后，蓮草直胸跳甲在美國、澳大利亞等地被廣泛應用于空心蓮子草的控制，并取得了較好的防治效果。我國于1986年從美國引進蓮草直胸跳甲，并應用于空心蓮子草的生物防治，在四川、浙江、福建、廣西等地取得一定的成功。

昆蟲表皮蛋白(cuticular proteins，CP)是結構蛋白，它和幾丁質一起組成昆蟲抵御外界環境屏障的角質層。環境、激素、轉錄因子和內含子等共同影響昆蟲表皮蛋白基因的表達，使 CP基因具有時期和組織特異性。CP 基因被認為是研究昆蟲蛻皮與變態的調控機理和理解昆蟲發育期角質層在生物化學、物理化學以及結構上的修飾的重要模型，受到越來越多的重視。

干燥、高滲透壓、季節性光周期等環境脅迫使昆蟲產生許多生理生化反應，并由此引起一系列相關基因的激活與沉默，從而反映昆蟲對環境脅迫的耐受能力。因此，表皮作為昆蟲抵御外界環境的第一道防線，當昆蟲受干燥脅迫、滲透脅迫、季節性光周期等環境條件影響時，CP的表達調控功能就會作出相應反應。Zhang等（2008）研究發現干燥處理馬鈴薯甲蟲能誘導CP基因表達，潮濕處理時 CP基因不表達，他們還發現殺蟲劑谷硫磷能夠高度地誘導馬鈴薯甲蟲表皮蛋白基因的表達，并使該昆蟲產生耐藥性。Le Trionnaire等（2007）在豌 豆 蚜 蟲頭部鑒定到受晝長縮短調控的 59 個不同的轉錄物，其中有 19 個是編碼不同的 CP，由此解釋光周期可以影響 CP的表達調控或者說 CP表達受光周期信號的調控，并可能與昆蟲的表皮發育相關。

關于蓮草直胸跳甲CP基因的表達等研究國內外未見報道，因此采用實時熒光定量PCR研究蓮草直胸跳甲雌雄蟲取食不同CO₂濃度培育的空心蓮子草后CP基因的表達特性，結果表明，隨著CO₂濃度的升高，雌雄蟲CP基因的表達量均升高，這與轉錄組表達量上調的變化趨勢一致，說明CO₂濃度升高可以影響CP基因的表達調控。這為全面深入地開展蓮草直胸跳甲CP基因的研究提供基礎數據，進一步揭示CP基因表達調控的內在規律，從而推進CP與昆蟲變態發育的關聯機制。

發明內容

本發明的目的在于提供檢測蓮草直胸跳甲CP基因表達特性的引物及其方法。

本發明的另一目的是為全面了解蓮草直胸跳甲CP基因的表達特性而設計的不同處理CO₂濃度。

為實現上述目的，本發明所采用的技術方案如下：

將取食不同CO₂濃度培育的空心蓮子草的蓮草直胸跳甲雌雄蟲各采9只到Eppendorf管中，分為3個生物學重復，共12組樣品。

設計一對檢測蓮草直胸跳甲CP基因表達特性的引物，包括符合熒光定量PCR反應特點的上下游引物：

CP-F：5`-TGTAGCAACGGGAGCAGATA-3`；

CP-R：5`-TACGCCGCACCTGTATCATA-3`；

以及作為內參基因的上下游引物：

Tubulin-F: 5`-AGATGTCCGCCACCTTCA-3`；