[發(fā)明專利]一種檢測鴨坦布蘇病毒E蛋白抗體的膠體金檢測卡

在審

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• 申請日: 2018-09-19
• 公開（公告）號: CN109061195A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 賈仁勇;鄧杰;劉艷紅;程安春;汪銘書;陳舜;朱德康;劉馬鋒;孫昆峰
• 申請（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558;G01N33/569
• 代理公司: 成都中亞專利代理有限公司 51126
• 代理人: 何淵

本發(fā)明公開了一種檢測鴨坦布蘇病毒E蛋白抗體檢測卡及其制備方法。采用雙抗原夾心法的原理，基于膠體金免疫層析技術(shù)而制成，該膠體金檢測卡包括加樣孔、觀測窗、樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜、吸收墊、PVC底板，在所述金標(biāo)墊上結(jié)合有金標(biāo)E蛋白和金標(biāo)羊抗鼠IgG，硝酸纖維素膜上有一條含有鴨坦布蘇病毒E蛋白的檢測線（T線）和另一條含有鼠IgG的質(zhì)控線（C線）。本發(fā)明用于檢測鴨坦布蘇病毒感染情況及鴨坦布蘇病毒流行情況的監(jiān)測，相比現(xiàn)有的檢測方法，價格低廉，簡便快捷，結(jié)果判斷直觀，靈敏準(zhǔn)確，可有效避免鉤狀效應(yīng)，同時保證假陽性被剔除而弱陽性不漏檢，更便于現(xiàn)場檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及獸醫(yī)生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測鴨坦布蘇病毒E蛋白抗體的膠體金檢測卡。

背景技術(shù)

2010年以來，我國多數(shù)水禽養(yǎng)殖區(qū)的鴨群陸續(xù)感染了鴨坦布蘇病毒（duckTembusu virus， DTMUV）。DTMUV是我國首次發(fā)現(xiàn)對鴨致病的新型黃病毒，在此之前，尚未有黃病毒大規(guī)模感染鴨的報道。DTMUV的感染可引起雛鴨死亡、肉鴨生長遲緩、蛋鴨產(chǎn)蛋下降甚至停產(chǎn)，且多數(shù)病鴨伴有腦炎樣神經(jīng)癥狀；剖檢感染鴨，可見卵巢出血、充血，卵泡破裂萎縮，腦組織病變、水腫等特征，因此，DTMUV感染引起的疾病又稱“鴨黃病毒病”、“鴨出血性卵巢炎”或“鴨產(chǎn)蛋下降-死亡綜合征”等。該病原傳播迅速，呈現(xiàn)出全國流行趨勢，目前我國華東、華中和華北等地區(qū)均已分離得到該病原；易感對象廣，可感染北京鴨、櫻桃谷鴨、紹興鴨等我國的主要養(yǎng)殖品種，發(fā)病率高達(dá)100%，死亡率在5%~30%之間，淘汰率為10~80%，給我國養(yǎng)鴨業(yè)造成了重大經(jīng)濟(jì)損失。

目前，對于DTMUV病原的檢測方法主要有病毒分離鑒定和分子生物學(xué)檢測。病毒分離鑒定是最傳統(tǒng)的病原學(xué)診斷方法，DTMUV可從病死鴨的卵泡膜、腦、脾臟和肝臟等病變組織中分離。分子生物學(xué)檢測方法特異性強(qiáng)、敏感性高，是醫(yī)學(xué)檢驗的重要手段，因此，針對檢測DTMUV抗原的相關(guān)方法如RT-PCR、套式PCR、熒光定量RT-PCR、RT-LAMP得到相繼研究。而對于DTMUV特異性抗體的檢測主要是血清學(xué)方法，目前關(guān)于檢測DTMUV抗體的血清學(xué)研究試驗主要有病毒中和試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗和乳膠凝集試驗等。CN102925585A公開了一種鴨坦布蘇病毒檢測試劑盒，該發(fā)明簡化了操作步驟，縮短了反應(yīng)時間，降低了污染幾率，并能提高檢測的準(zhǔn)確度和速度，但一個檢測反應(yīng)需要約2小時內(nèi)，耗時較長。CN103993105A公開了一種鴨坦布蘇病毒和禽流感病毒多重PCR檢測試劑盒，該發(fā)明所采用的技術(shù)手段為三對特異性引物的堿基序列組成，該方法操作復(fù)雜，需要的引物多，同時對操作人員的技術(shù)要求高，在基層實驗室的推廣受阻，在臨床的快速檢測方面具有一定局限性。雖然目前有大量以膠體金技術(shù)作為免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域、藥物領(lǐng)域的檢測發(fā)明，但國內(nèi)外尚無使用該技術(shù)對鴨坦布蘇病毒監(jiān)控的報道。

基于上述分析，一種技術(shù)成本低，簡便快捷，無需特殊設(shè)備和專業(yè)技術(shù)人員，結(jié)果判斷直觀，靈敏準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好的檢測鴨坦布蘇病毒E蛋白抗體的膠體金檢測卡是行業(yè)內(nèi)急需的。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于上述不足，本發(fā)明的目的在于提供一種檢測鴨坦布蘇病毒E蛋白抗體的膠體金檢測卡及其制備方法。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案，本發(fā)明各組分的用量也是經(jīng)過發(fā)明人進(jìn)行大量摸索總結(jié)得出的，各組分和配伍制備出的檢測鴨坦布蘇病毒E蛋白抗體的膠體金檢測卡均具有良好的效果：

一種檢測鴨坦布蘇病毒E蛋白抗體檢測卡，包括外殼（1）和置于外殼內(nèi)的試紙條（2），所述外殼（1）上開有觀測窗（11）和加樣孔（12）；所述試紙條（2）由樣品墊（21）、金標(biāo)墊（22）、硝酸纖維素膜（23）、吸收墊（24）順次搭接粘貼在PVC底板（25）上構(gòu)成，確保接頭處有疊壓，使層析能順利進(jìn)行；其中所述金標(biāo)墊（22）上結(jié)合有金標(biāo)E蛋白和金標(biāo)羊抗鼠IgG，所述硝酸纖維素膜上有一條含有鴨坦布蘇病毒E蛋白的T線（26）和另一條含有鼠IgG的C線（27）；

包括以下步驟：