[發(fā)明專利]一種天使紅軟籽石榴組織培養(yǎng)快繁方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811093513.6
• 申請日: 2018-09-19
• 公開（公告）號: CN109042333B
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 苑兆和;火艷;徐會(huì)麗
• 申請（專利權(quán)）人: 南京林業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京知識律師事務(wù)所 32207
• 代理人: 江艷麗

本發(fā)明公開了一種天使紅軟籽石榴組織培養(yǎng)快繁方法，屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，包括如下工藝：采集幼嫩的莖段，用75%的酒精消毒30 s 后用0.1%的升汞消毒10 min，接種在不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；待不定芽長出后，切去葉片兩端并切斷葉脈接種到葉片愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基；將由莖段誘導(dǎo)產(chǎn)生的和由葉片愈傷分化產(chǎn)生的不定芽接種到增殖培養(yǎng)基上；當(dāng)單苗長至5?6cm 后移植到生根培養(yǎng)基上；當(dāng)單苗根長到到3?4cm后煉苗。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：能夠誘導(dǎo)天使紅軟籽石榴試管苗快速增殖產(chǎn)生大量不定芽，誘導(dǎo)率高達(dá)92.22%，為工廠化育苗提供了一條有效的途徑。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種天使紅軟籽石榴組織培養(yǎng)快繁方法。

背景技術(shù)

石榴（Punica granatum L.），屬于千屈菜科（Lythraceae）石榴屬(Punica L.)果樹，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值和保健功能，近年來石榴越來越受到消費(fèi)市場的青睞，石榴產(chǎn)業(yè)在國內(nèi)外發(fā)展迅速。軟籽石榴的種皮較軟，種仁退化，籽粒大，在鮮食消費(fèi)方面具有較高的價(jià)值。目前我國石榴栽培中軟籽品種所占比例相對較少，市場售價(jià)是普通品種的2-4倍，市場前景廣闊。天使紅軟籽石榴是從美國引進(jìn)的優(yōu)良軟籽石榴品種，果個(gè)中等，果皮紅色，酸甜適口，出汁率高，株型矮小，優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)。

由于天使紅軟籽石榴品種珍貴、資源較少，利用常規(guī)的育種方法無法滿足當(dāng)前生產(chǎn)與市場需求，無法實(shí)現(xiàn)植物組織培養(yǎng)繁殖速度快、保持原有品種的優(yōu)良性狀、可進(jìn)行周年工廠化生產(chǎn)等優(yōu)勢。目前，還沒有天使紅軟籽石榴的組培快繁研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

為克服上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種天使紅軟籽石榴組織培養(yǎng)快繁方法，該方法簡單、可操作性強(qiáng)，為快速、穩(wěn)定的繁殖天使紅軟籽石榴提供了高效可行的途徑，為工廠化生產(chǎn)優(yōu)良苗木奠定了理論基礎(chǔ)。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種天使紅軟籽石榴組織培養(yǎng)快繁方法，包括以下步驟：

1）采集幼嫩的莖段為外植體，用75%的酒精消毒30 s后用0.1%的升汞消毒10 min，無菌水充分清洗；

2）將消毒后的莖段接種在配方為WPM +2 g/L PVP+ 0.5 mg/L NAA + 1.0 mg/L6-BA的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。

3）待不定芽長出后，選用誘導(dǎo)過程中產(chǎn)生的葉片，切去葉片兩端并切斷葉脈接種到配方為WPM + 0.5 mg/L NAA + 1.0 mg/L 6-BA的葉片愈傷組織誘導(dǎo)及分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

4）將由莖段誘導(dǎo)產(chǎn)生的不定芽和由葉片愈傷分化產(chǎn)生的不定芽接種到配方為WPM+ 0.1 mg/L NAA + 1.0 mg/L 6-BA的增殖培養(yǎng)基上。

5）剪取生長健壯、長5-6cm 的單苗進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為1/2 MS + 0.7mg/L IBA+ 0.2 g/L PVP。

6）當(dāng)單苗根長達(dá)到3-4cm的組培苗從培養(yǎng)室取出，將培養(yǎng)瓶移到溫室中進(jìn)行強(qiáng)光閉瓶煉苗5-20d左右，遮陰度宜為50%-70%，然后打開瓶口，再放置3-7d；當(dāng)組培苗根長達(dá)到5-6cm且植株長勢良好時(shí)進(jìn)行移栽。移栽基質(zhì)選擇草炭和蛭石以2:1的比例混合，充分混合后用高溫滅菌。移栽環(huán)境的溫度在25-28℃，濕度在80％-85％，光照時(shí)間每天12-14 h。