[發明專利]一種天使紅軟籽石榴組織培養快繁方法

有效

• 申請號: 201811093513.6
• 申請日: 2018-09-19
• 公開（公告）號: CN109042333B
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 苑兆和;火艷;徐會麗
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 江艷麗

1.一種天使紅軟籽石榴組織培養快繁方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）采集幼嫩的莖段為外植體，用75%的酒精消毒30 s后用0.1%的升汞消毒10 min，無菌水充分清洗；

2）將消毒后的莖段接種在配方為WPM +2 g/L PVP+ 0.5 mg/L NAA + 1.0 mg/L 6-BA的不定芽誘導培養基上；

3）待不定芽長出后，選用誘導過程中產生的葉片，切去葉片兩端并切斷葉脈接種到配方為WPM + 0.5 mg/L NAA + 1.0 mg/L 6-BA的葉片愈傷組織誘導及分化誘導培養基上；

4）將由莖段誘導產生的不定芽和由葉片愈傷分化產生的不定芽接種到配方為WPM +0.1 mg/L NAA + 1.0 mg/L 6-BA的增殖培養基上；

5）剪取生長健壯、長5-6cm 的單苗進行生根培養，生根培養基為1/2 MS + 0.7 mg/LIBA+ 0.2 g/L PVP；

6）當單苗根長達到3-4cm的組培苗從培養室取出，將培養瓶移到溫室中進行強光閉瓶煉苗5-20d左右，遮陰度宜為50%-70%，然后打開瓶口，再放置3-7d；當組培苗根長達到5-6cm且植株長勢良好時進行移栽。

2.如權利要求1所述的一種天使紅軟籽石榴組織培養快繁方法，其特征在于，所述的步驟2）、3）、4）中的WPM 基本培養基包含6.5 g/L瓊脂和30 g/L蔗糖，以及包括以下成分：NH₄NO₃ 400mg/L、Ca(NO₃)2·4H₂O 556mg/L、CaCl₂·2H₂O 96mg/L、MgSO₄·7H₂O 370mg/L、KH₂PO₄ 170mg/L、K₂SO₄ 990mg/L、H₃BO₃ 6.2mg/L、MnSO₄·H₂O 22.4mg/L、ZnSO₄·7H₂O8.6mg/L、NaMoO₄·2H₂O 0.25mg/L、CuSO₄·5H₂O 0.25mg/L、FeSO₄·7H₂O₂ 7.8mg/L、Na₂-EDTA37.3mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、煙酸0.5mg/L、維生素B1 1.0mg/L、維生素B6 0.5mg/L。

3.如權利要求1所述的一種天使紅軟籽石榴組織培養快繁方法，其特征在于，所述的步驟5）中的MS 基本培養基包含6.5 g/L瓊脂和30 g/L蔗糖，以及以下成分：NH₄NO₃ 1650mg/L、KNO₃ 1900mg/L、MgSO₄·7H₂O 370mg/L、KH₂PO₄ 170mg/L、CaCl₂·2H₂O 440 mg/L、KI 0.83mg/L、H₃BO₃ 6.2mg/L、MnSO₄·4H2O 22.3mg/L、ZnSO₄·7H₂O 8.6mg/L、NaMoO₄·2H₂O 0.25mg/L、CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L、CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L、FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L、Na₂-EDTA37.25mg/L、肌醇 100mg/L、甘氨酸2mg/L、煙酸0.5mg/L、維生素B6 0.5mg/L、維生素B1 0.1mg/L。