[發(fā)明專利]化學物誘發(fā)人食管癌的體外檢測模型的建立方法

在審

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• 申請日: 2018-09-17
• 公開（公告）號: CN109295156A
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發(fā)明（設計）人: 楊輝;賈旭東;張倩男
• 申請（專利權）人: 國家食品安全風險評估中心
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12N5/09
• 代理公司: 北京華進京聯(lián)知識產權代理有限公司 11606
• 代理人: 王賽

本發(fā)明公開了一種化學物誘發(fā)人食管癌的體外檢測模型的建立方法，包括以下步驟：提供接種在體外培養(yǎng)容器中的人食管上皮細胞；對所述人食管上皮細胞分別施加預定濃度范圍內的多個濃度的待檢化學物后培養(yǎng)預定時間，測定所述人食管上皮細胞的細胞活力隨所述待檢化學物施加濃度的變化的曲線；選取所述曲線中的預定細胞活力范圍對應的所述待檢化學物的濃度區(qū)間作為致癌測定濃度區(qū)間，選取所述致癌測定濃度區(qū)間的多個濃度作為致癌測定濃度；以及對所述人食管上皮細胞分別施加所述致癌測定濃度的所述待檢化學物，進行所述待檢化學物對所述人食管上皮細胞的致癌實驗檢測。

技術領域

本發(fā)明涉及生物技術領域，特別是涉及一種化學物誘發(fā)人食管癌的體外檢測模型的建立方法。

背景技術

癌癥發(fā)生通常是遺傳因素與環(huán)境因素交互作用的結果，一般認為90％的人類癌癥均與環(huán)境因素有關，其中主要是化學物因素，占90％以上。目前，嚙齒類動物長期致癌試驗是唯一被各國監(jiān)管機構接受的化學物致癌性標準評價方法。雖然其他試驗方法如構效關系分析、遺傳毒性試驗、體外細胞轉化試驗和人群腫瘤流行病學調查等用于化學物致癌作用的評價，但還沒有一種理想的測試系統(tǒng)能夠代替嚙齒類動物致癌試驗。化學物是誘發(fā)人食管癌的主要因素，目前基于化學物對人食管癌的研究主要基于動物實驗。基于動物實驗的致癌試驗研究耗時長、投入大，不利于高通量檢測大量化學物的毒性。另一方面，現(xiàn)行的致癌性動物試驗在應用于化學物安全毒理學評價時也存在很多局限性，主要體現(xiàn)在：動物染毒劑量遠遠高于人體實際暴露水平；小數(shù)量實驗動物到大量人群的致癌性具有極大的不確定性；無法測定化合物的混合暴露和交互作用等。

近幾十年來，隨著實驗動物使用的替代、減少、優(yōu)化“幾十年原則的倡導與實施以及生物醫(yī)學研究模式的轉變，替代動物實驗的體外模型研究已成為毒理學發(fā)展的重要方向，基于人源細胞的、以毒性通路為核心的轉化毒理學研究得到學術界、工業(yè)界及監(jiān)管機構的廣泛關注。目前的毒理學試驗體外替代方法在急性毒性試驗如皮膚刺激試驗等得到了應用，但是在慢性毒性和致癌試驗或觀察復雜效應終點時遇到困難。因此，缺乏高效、準確的體外實驗方法來明確化學物與誘發(fā)人食管癌的關系。

發(fā)明內容

基于此，有必要提供一種化學物誘發(fā)人食管癌的體外檢測模型的建立方法，用于高效、準確的檢測化學物與誘發(fā)人食管癌的關系。

一種化學物誘發(fā)人食管癌的體外檢測模型的建立方法，包括以下步驟：

提供接種在體外培養(yǎng)容器中的人食管上皮細胞；

對所述人食管上皮細胞分別施加預定濃度范圍內的多個濃度的待檢化學物后培養(yǎng)預定時間，測定能夠反映所述人食管上皮細胞的細胞活力隨所述待檢化學物施加濃度的變化的曲線；

選取所述曲線中的預定細胞活力范圍對應的所述待檢化學物的濃度區(qū)間作為致癌測定濃度區(qū)間，選取所述致癌測定濃度區(qū)間的多個濃度作為致癌測定濃度；以及

對所述人食管上皮細胞分別施加所述致癌測定濃度的所述待檢化學物，進行所述待檢化學物對所述人食管上皮細胞的致癌實驗檢測。

在其中一個實施例中，所述人食管上皮細胞在所述培養(yǎng)容器中的接種濃度為8×10⁴/ml～2×10⁵/ml。

在其中一個實施例中，所述預定濃度范圍的最低濃度為0～100nmol/L，所述預定濃度范圍的最高濃度為10mmol/L～100mmol/L。

在其中一個實施例中，所述預定細胞活力范圍內的最低細胞活力為90％～95％。

在其中一個實施例中，所述預定濃度范圍內的多個濃度為等比數(shù)列。

在其中一個實施例中，所述多個致癌測定濃度為等比數(shù)列。