[發明專利]化學物誘發人食管癌的體外檢測模型的建立方法在審
| 申請號： | 201811092820.2 | 申請日： | 2018-09-17 |
| 公開（公告）號： | CN109295156A | 公開（公告）日： | 2019-02-01 |
| 發明（設計）人： | 楊輝;賈旭東;張倩男 | 申請（專利權）人： | 國家食品安全風險評估中心 |
| 主分類號： | C12Q1/02 | 分類號： | C12Q1/02;C12N5/09 |
| 代理公司： | 北京華進京聯知識產權代理有限公司 11606 | 代理人： | 王賽 |
| 地址： | 100020 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 化學物 食管上皮細胞 致癌 濃度區間 體外檢測模型 人食管癌 細胞活力 施加 誘發 體外培養 致癌實驗 接種 檢測 | ||
1.一種化學物誘發人食管癌的體外檢測模型的建立方法，包括以下步驟：
提供接種在體外培養容器中的人食管上皮細胞；
對所述人食管上皮細胞分別施加預定濃度范圍內的多個濃度的待檢化學物后培養預定時間，測定能夠反映所述人食管上皮細胞的細胞活力隨所述待檢化學物施加濃度的變化的曲線；
選取所述曲線中的預定細胞活力范圍對應的所述待檢化學物的濃度區間作為致癌測定濃度區間，選取所述致癌測定濃度區間的多個濃度作為致癌測定濃度；以及
對所述人食管上皮細胞分別施加所述致癌測定濃度的所述待檢化學物，進行所述待檢化學物對所述人食管上皮細胞的致癌實驗檢測。
2.根據權利要求1所述的化學物誘發人食管癌的體外檢測模型的建立方法，其特征在于，所述人食管上皮細胞在所述培養容器中的接種濃度為8×104/ml～2×105/ml。
3.根據權利要求1所述的化學物誘發人食管癌的體外檢測模型的建立方法，其特征在于，所述預定濃度范圍的最低濃度為0～100nmol/L，所述預定濃度范圍的最高濃度為10mmol/L～100mmol/L。
4.根據權利要求1所述的化學物誘發人食管癌的體外檢測模型的建立方法，其特征在于，所述預定細胞活力范圍內的最低細胞活力為90％～95％。
5.根據權利要求1所述的化學物誘發人食管癌的體外檢測模型的建立方法，其特征在于，所述預定濃度范圍內的多個濃度為等比數列。
6.根據權利要求1所述的化學物誘發人食管癌的體外檢測模型的建立方法，其特征在于，所述多個致癌測定濃度為等比數列。
7.根據權利要求1所述的化學物誘發人食管癌的體外檢測模型的建立方法，其特征在于，所述待檢化學物對所述人食管上皮細胞的致癌實驗檢測包括細胞增殖能力檢測、細胞遷移和侵襲能力檢測以及所述待檢化學物誘發動物成瘤實驗檢測中的一種或多種。
8.根據權利要求1所述的化學物誘發人食管癌的體外檢測模型的建立方法，其特征在于，還包括對所述致癌實驗檢測中所述待檢化學物誘發所述人食管上皮細胞成癌的腫瘤細胞進行基因表達分析，確定表達差異的基因與人體代謝通路的關系。
9.根據權利要求1所述的化學物誘發人食管癌的體外檢測模型的建立方法，其特征在于，還包括檢測添加人肝微粒體對所述人食管上皮細胞的體外培養下的細胞活力影響的步驟。
10.根據權利要求1所述的化學物誘發人食管癌的體外檢測模型的建立方法，其特征在于，所述人食管上皮細胞的培養條件為5％二氧化碳，培養溫度為37℃。
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