[發明專利]一株海洋弧菌及其分離方法與應用

在審

• 申請號: 201811091769.3
• 申請日: 2018-09-19
• 公開（公告）號: CN109161504A
• 公開（公告）日: 2019-01-08
• 發明（設計）人: 趙哲;劉宇鵬;史燕;吳超;朱馨媛
• 申請（專利權）人: 河海大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12N9/24;C12R1/63
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 嚴曉彪;董建林

本發明公開了一株海洋弧菌及其分離方法，進一步從華南沿海地區海水樣本中分離獲得一株產瓊脂糖酶的海洋弧菌HN897，于2018年8月8日保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，其保藏號為CGMCC NO.16232，菌種鑒定分析顯示其為Vibrio astriarenae。在固體瓊脂平板上培養該菌株顯示其具有降解瓊脂的能力，在2種培養液中(TSB和LB)所分泌的瓊脂糖酶活性，表明該菌株具有高產瓊脂糖酶的能力；由此，本發明的弧菌HN897在瓊脂寡糖等生物醫藥領域具有廣闊的應用和市場前景，同時為后續制備活力強、純度高的酶制品奠定基礎。

技術領域

本發明涉及一株海洋弧菌，具體涉及一株海洋弧菌及其分離方法與應用，屬于生物醫藥技術領域。

背景技術

瓊脂糖酶(Agarase)是1類糖苷水解酶，能夠催化瓊脂多糖分解為低聚糖。瓊脂糖是1種線性大分子，由D-半乳糖和3，6-內醚-α-L-半乳糖通過α-1，3 和β-1，4糖苷鍵交替連接形成。

根據所催化糖苷鍵的不同，瓊脂糖酶又可以分為α-瓊脂糖酶(EC3.2.1.158) 和β-瓊脂糖酶(EC3.2.1.81)2類；其中前者專一性作用于瓊脂糖的α-1，3糖苷鍵，生成了瓊脂寡糖，分別以β-D-半乳糖為非還原性末端和以3，6-內醚-α -L-半乳糖為還原性末端的瓊脂寡糖(Agaro-oligosaccharides)，而后者則特異性作用于瓊脂糖的β-1，4糖苷鍵，生成以β-D-半乳糖為還原性末端和以3，6-內醚 -α-L-半乳糖為非還原性末端的(Neoagaro-oligosaccharides)。

因此，瓊脂糖酶可以幫助制備具有生物活性的瓊脂寡糖，瓊脂寡糖有著抗氧化、免疫調節、降血脂等作用，在醫藥領域有著廣泛的應用前景。

瓊脂糖酶分布比較廣泛，在多種海洋物質中可以找到，如海洋軟體動物、海藻、海洋微生物和海洋沉積物，但利用瓊脂糖作為碳源的海洋微生物是瓊脂糖酶生產的主要來源。

海洋微生物來源的瓊脂糖酶不僅種類多，而且具有產量高、適應條件廣等優點，是瓊脂糖酶研究領域的熱點。自1902年Gram從海水中分離鑒定出第1 株降解瓊脂的芽孢桿菌以后，陸續已有20多個種屬的細菌產瓊脂糖酶，主要集中在弧菌(Vibrio spp.)、假單胞菌(Pseudomonas spp.)和假交替單胞菌 (Pseudoalteromonas spp.)等革蘭氏陰性的海洋細菌中。

目前，瓊脂酶的研究方法已經比較成熟，國外研究起步較早，已發現多種能產生瓊脂酶的細菌及對應的瓊脂酶，如AgaA，AgaB和AgaC等，研究重點也已從細菌提取瓊脂酶轉向對瓊脂酶基因進行研究并通過將該基因重組在大腸桿菌中進行原核表達以獲得更多更純凈的瓊脂酶；國內研究比較晚，但是在國外研究的基礎上，也取得了一些突破。

總結國內外當前的研究，存在以下問題尚待解決，一部分是α-瓊脂酶的天然來源較少，因此對α-瓊脂酶的研究比較少；另一部分是目前研究得出的高純度瓊脂酶相當昂貴，瓊脂酶降解瓊脂生成的副產物尚未能真正廣泛用于工業生產。

發明內容

為解決現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種能夠產瓊脂糖酶的海洋弧菌及其分離方法。

為了實現上述目標，本發明采用如下的技術方案：

一種海洋弧菌，其保藏號為CGMCC NO.16232，于2018年8月8日保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，菌種鑒定分析顯示為Vibrio astriarenae。

上述的一種海洋菌株，應用于產瓊脂糖酶。

上述的一種海洋菌株，其特征在于，應用于制備酶制品。

根據權利要求1所述的一種海洋菌株的分離方法，其特征在于，包括以下步驟：