[發明專利]一種豬瘟病毒和豬偽狂犬病毒的二聯金標檢測試紙及其制備方法

有效

• 申請號: 201811091645.5
• 申請日: 2018-09-19
• 公開（公告）號: CN109187968B
• 公開（公告）日: 2022-01-28
• 發明（設計）人: 張改平;王愛萍;陳玉梅;劉東民;周景明;王彥偉;祁艷華;劉燕凱;劉紅亮;秦云飛;李永欣
• 申請（專利權）人: 鄭州大學;河南中澤生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/531
• 代理公司: 鄭州市華翔專利代理事務所(普通合伙) 41122
• 代理人: 張愛軍

本發明公開了一種豬瘟病毒和豬偽狂犬病毒的二聯金標檢測試紙及其制備方法，包括支撐板、樣品墊、金標墊、NC膜和吸水墊，NC膜上含有豬瘟病毒檢測線T1“│”，豬偽狂犬病毒檢測線T2“│”和質控線C“│”印跡。檢測時，在檢測膜顯現三條紅色條帶“│││”為豬瘟病毒和豬偽狂犬病毒共感染，出現檢測線T1和質控線C兩條紅色條帶“││”為只有豬瘟病毒感染；出現檢測線T2和質控線C兩條紅色條帶“││”為只有豬偽狂犬病毒感染；只顯現一條紅色條帶“│”為陰性，兩種病毒都未感染。本檢測試紙特異性強，敏感性高，反應譜廣，可檢測現有多數流行毒株，且操作簡便、快速，可廣泛用于豬瘟病毒感染與豬偽狂犬病毒感染檢測，易于在生產實踐中推廣應用。

技術領域

本發明涉及種同時對兩種家畜疫病鑒定的檢測器具，特別是涉及一種豬瘟病毒和豬偽狂犬病毒的二聯金標檢測試紙及其制備方法。

背景技術

豬瘟(classical swine fever,CSF)是由豬瘟病毒(classical swinefevervirus,CSFV)引起的一種以高熱、出血和高死亡率為特征的高度接觸性傳染病，世界動物衛生組織(OIE)將其列入OIE疫病名錄，為需申報的動物傳染病，我國列為一類動物疫病。我國采用免疫豬瘟兔化弱毒(hog cholera lapinized vaccine，HCLV)疫苗預防和控制了CSF的大規模流行，但近年來CSF的流行和發病特點又發生新變化，多表現為非典型、慢性和隱性感染，出現了所謂“非典型豬瘟”、“溫和型豬瘟”和“帶毒母豬綜合征”，因此其仍是危害養豬業的主要傳染病之一。CSFV屬于黃病毒科(Flaviviridae)瘟病毒屬(Pestivirus)，與同屬的牛病毒性腹瀉病毒1型(bovine diarrhea virus 1,BVDV-1)、牛病毒性腹瀉病毒2型(BVDV-2)、綿羊邊界病毒(border disease virus,BDV)和長頸鹿瘟病毒(pestivirus ofgiraffe)具有很高的同源性，并存在血清學交叉反應。CSFV基因組為單股正鏈RNA，大小約12.3kb，由5’端非編碼區(5’-untranslated region,5’-UTR)、一個開放閱讀框(openreading frame,ORF)和3’-端非編碼區(3’-UTR)構成，且5’端無甲基化“帽子”結構，3’端無多聚腺苷酸(poly A)結構。CSFV的ORF編碼約3899個氨基酸殘基的多聚蛋白前體，由病毒和宿主細胞蛋白酶加工形成12種成熟的病毒蛋白，即C、Erns、E1和E2等4種結構蛋白和Npro、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B等8種非結構蛋白。依據5’-UTR、E2和NS5B基因序列差異，CSFV分為3個基因群，10個基因亞群，即1.1、1.2、1.3，2.1、2.2、2.3，3.1、3.2、3.3和3.4。流行病學調查顯示，我國2000年后的CSFV流行毒株分為3個基因亞群，即1.1、2.1和2.2，其中2.1基因亞群在我國豬瘟流行中占主導地位。

偽狂犬病(Pseudorabies,PR)是由偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的一種多種動物共患的傳染病；豬PRV是一種豬的皰疹病毒，分類學命名為豬皰疹病毒I型(Suid herpesvirus1)。豬是PRV的傳染源和自然貯存宿主，感染后表現為發熱、仔豬神經癥狀和高死亡率、大中豬出現呼吸道癥狀等臨床特征。消化道、呼吸道、精液、胎盤及空氣等是PRV的主要傳播途徑。PRV對于口鼻部呼吸道的上皮細胞具有非常強的嗜性；其基因組是大小約為150kb的線性雙鏈DNA，編碼70-100余種蛋白。2011年底，在河北、河南、山東、山西等多個省份許多使用Bartha-K61疫苗免疫豬場爆發了疑似PR的疫病，發病豬出現高溫(40-42℃)、食欲不振、咳嗽、腹瀉并伴隨有系統性神經癥狀，新生仔豬死亡率高；病毒分離等實驗證實引起這場疫病爆發的源頭是變異的PRV病毒，這對PR的防控提出了嚴峻挑戰。目前PRV主要疫苗依然是Bartha-K61株或者新變異株的gE缺失苗，因此檢測gE蛋白及其抗體是判斷PRV感染與否的關鍵。