[發明專利]NADH依賴性的氨基酸脫氫酶及其在提高賴氨酸產量中的應用

在審

• 申請號: 201811089319.0
• 申請日: 2018-09-18
• 公開（公告）號: CN109182283A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發明（設計）人: 陳振;劉德華
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N9/06;C12N15/53;C12N15/63;C12P13/08;C12P13/00;A23K20/189;A23K10/18
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

1.NADH依賴性的氨基酸脫氫酶，所述氨基酸脫氫酶為：

來源于Pseudomonas aeruginos的天冬氨酸脫氫酶；

來源于Tistrella mobilis的天冬氨酸半醛脫氫酶；

來源于Mycobacterium tuberculosis的二氫吡啶二羧酸還原酶；和/或

來源于Tepidanaerobacter acetatoxydans的二氨基庚二酸脫氫酶；

其氨基酸序列分別如SEQ ID NO.1、3、5、7所示或如SEQ ID No.1、3、5、7所示氨基酸序列經取代、缺失和/或增加一個或幾個氨基酸而不影響其生物活性的氨基酸序列。

2.編碼權利要求1所述NADH依賴性的氨基酸脫氫酶的基因，其特征在于，其核苷酸序列分別含有如SEQ ID NO.2、4、6、8所示的核苷酸序列或SEQ ID No.2、4、6、8所示核苷酸序列經取代、缺失和/或增加一個或幾個堿基的具有90％以上同源性的、編碼相同功能氨基酸脫氫酶的核苷酸序列。

3.含有權利要求2所述基因的生物材料，其特征在于，所述生物材料為載體、重組菌、細胞系或表達盒。

4.如權利要求3所述的生物材料，其特征在于，所述重組菌為可以發酵生產賴氨酸或戊二胺的菌株中含有或過表達權利要求1所述的NADH依賴性的氨基酸脫氫酶。

5.如權利要求4所述的生物材料，其特征在于，所述重組菌為可以發酵生產賴氨酸或戊二胺的菌株中含有或過表達來源于Pseudomonas aeruginos的天冬氨酸脫氫酶和來源于Tistrella mobilis的天冬氨酸半醛脫氫酶；或

含有或過表達來源于Pseudomonas aeruginos的天冬氨酸脫氫酶、來源于Tistrellamobilis的天冬氨酸半醛脫氫酶和來源于Mycobacterium tuberculosis的二氫吡啶二羧酸還原酶；或

含有或過表達來源于Pseudomonas aeruginos的天冬氨酸脫氫酶、來源于Tistrellamobilis的天冬氨酸半醛脫氫酶、來源于Mycobacterium tuberculosis的二氫吡啶二羧酸還原酶和來源于Tepidanaerobacter acetatoxydans的二氨基庚二酸脫氫酶。

6.如權利要求3-5任一所述的生物材料，其特征在于，所述重組菌為可以發酵生產賴氨酸或戊二胺的菌株中NADPH-依賴性的氨基酸脫氫酶被權利要求1所述的NADH依賴性的氨基酸脫氫酶所替代。

7.權利要求1所述的NADH依賴性的氨基酸脫氫酶或其編碼基因或權利要求3-6任一所述的生物材料在制備賴氨酸或戊二胺中的應用。

8.權利要求1所述的NADH依賴性的氨基酸脫氫酶或其編碼基因或權利要求3-6任一所述的生物材料在提高賴氨酸產量或提高戊二胺產量中的應用。

9.如權利要求7或8所述的應用，其特征在于，發酵生產戊二胺時，發酵菌株中內源的lysE基因被大腸桿菌的賴氨酸脫羧酶基因cadA所替換。

10.權利要求1所述的NADH依賴性的氨基酸脫氫酶或其編碼基因或權利要求3-6任一所述的生物材料在制備藥物或飼料添加劑中的應用。