[發(fā)明專利]一種高通量選育石油降解突變株的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811079881.5
• 申請(qǐng)日: 2018-09-17
• 公開（公告）號(hào): CN109182183A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鐘成;劉正;田亞?wèn)|;賈士儒;謝燕燕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N15/01;C12R1/01
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種高通量選育石油降解突變株的方法，其特征在于：將種子液離心重懸，得到菌懸液并調(diào)節(jié)至適宜菌體密度。分別采用單一化學(xué)誘變、常溫室壓等離子體誘變(ARTP)以及單一化學(xué)誘變和常溫室壓等離子體誘變系統(tǒng)(ARTP)復(fù)合誘變方法對(duì)菌懸液進(jìn)行誘變。將誘變后菌株接種到含油培養(yǎng)基的深96孔板中培養(yǎng)，以紫外分光光度法計(jì)算孔板中殘油含量，測(cè)定石油烴降解率。選取石油烴降解能力高且穩(wěn)定的誘變菌株。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高通量選育石油降解突變株的方法，其特征在于，菌株經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)并離心重懸后，用血球計(jì)數(shù)板調(diào)節(jié)菌體濃度為0.6×10⁷-0.8×10⁷/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高通量選育石油降解突變株的方法，其特征在于，以0％、0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、1.0％、1.2％、1.5％梯度向TSB固體培養(yǎng)基中加入氯化鋰水溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高通量選育石油降解突變株的方法，其特征在于，以10μL菌懸液注射到ARTP誘變系統(tǒng)專用鐵片上，無(wú)菌風(fēng)吹干形成菌膜，以氦氣為工作氣體，氣流量設(shè)定為10L/min，作用距離3mm，作用功率120W的等離子體射線輻照處理，操作溫度為28℃，處理時(shí)間分別設(shè)定為0、60、120、180、210、240、270、300s。將經(jīng)過(guò)不同輻照時(shí)間處理的菌膜以2mL無(wú)菌生理鹽水洗脫制成菌懸液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高通量選育石油降解突變株的方法，其特征在于，取菌懸液經(jīng)ARTP誘變適宜時(shí)間后，涂布于含適宜濃度氯化鋰溶液的TSB固體培養(yǎng)基中。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高通量選育石油降解突變株的方法，其特征在于，以96孔板發(fā)酵法代替搖瓶發(fā)酵法，采用紫外分光光度法高通量篩選誘變菌株。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高通量選育石油降解突變株的方法，其特征在于，所用微生物是戈登氏菌。