[發(fā)明專利]一種快速檢測遺傳性皮膚敏感基因的方法

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• 申請日: 2018-09-10
• 公開（公告）號: CN109182476A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王亮;趙紹軍;蔣桂瑾
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州益養(yǎng)生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明為一種快速檢測遺傳性皮膚敏感基因的方法，涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及檢測三個基因、四個SNP位點，提供四個待檢測位點的檢測用特異性引物(詳見表1)。本發(fā)明采用高分辨率熔解曲線分析技術(shù)(High Resolution Melting，HRM)以分析待檢測樣本的各SNP位點基因型。為輔助分析待檢測樣品的基因型，本發(fā)明還將提供各SNP位點對應(yīng)標準基因型模板(含野生型、突變雜合型及突變型)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明為一種快速檢測遺傳性皮膚敏感基因的方法，涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，尤其針對美膚行業(yè)膚質(zhì)評測。

背景技術(shù)

目前，常用的基因檢測方法為測序法、基因芯片法、飛行質(zhì)譜法，這些方法都需要在完成PCR擴增后進行后續(xù)實驗分析，實驗周期相對較長，適用于中、高通量的SNP檢測。使用支持高分辨率熔解曲線分析技術(shù)(High Resolution Melting，HRM)的儀器僅需要一次PCR擴增后即可根據(jù)擴增產(chǎn)物直接進行分析報告得出樣品的基因型，極大的縮短了實驗時長。

HRM是一種基于單核苷酸熔解溫度不同而形成不同形態(tài)熔解曲線的基因分析新技術(shù)，具有極高的敏感性，可以檢測出單個堿基的差異，并且成本低、通量高、速度快、結(jié)果準確、不受檢測位點的局限，實現(xiàn)了真正的閉管操作。

HRM無需使用序列特異性探針，而是利用一種飽和染料對PCR反應(yīng)產(chǎn)物進行分析。基本原理：雙鏈核苷酸(double strand DNA，dsDNA)的熱穩(wěn)定性受具長度和堿基組成的影響，序列變化會導(dǎo)致升溫過程中dsDNA解鏈行為的改變。因為所用的熒光染料只能嵌入并結(jié)合到dsDNA上，因此利用實時PCR技術(shù)，通過實時檢測dsDNA熔解過程中熒光信號值的變化，就能以生成不同形狀熔解曲線的方式將PCR產(chǎn)物中存在的差異直觀地展示出來。同時，借助于專業(yè)性的分析軟件就可以對測試群體實現(xiàn)基于不同形狀熔解曲線的基因分型或歸類。

皮膚敏感性主要由皮膚物理屏障作用能力決定的，同時受皮膚免疫屏障作用能力、身體解毒能力影響。皮膚物理屏障作用能力通常由皮脂膜、角質(zhì)層角蛋白、脂質(zhì)、磚墻結(jié)構(gòu)、真皮粘多糖類、粘多糖類等共同構(gòu)成，抵御外界有害、刺激物、日光進入，同時具有保濕及調(diào)節(jié)抗炎作用；皮膚免疫屏障作用能力則由相關(guān)酶調(diào)節(jié)控制免疫細胞，達到抗炎癥效果；身體解毒能力是相關(guān)水解酶參與轉(zhuǎn)化有害物質(zhì)的過程，身體必須及時處理進入皮膚的有害物質(zhì)，防止皮膚過敏反應(yīng)。

絲氨酸蛋白酶抑制因子5基因(erine peptidase inhibitor，Kazal type 5，SPINK5)該基因編碼多結(jié)構(gòu)域絲氨酸蛋白酶抑制劑，其含有15個潛在的抑制結(jié)構(gòu)域，對編碼的前體蛋白進行蛋白水解加工以產(chǎn)生多種蛋白質(zhì)產(chǎn)物。這些蛋白質(zhì)多存在皮膚、毛發(fā)以及粘液中保護作用，主要作用為上皮細胞的抗炎和抗微生物。該基因的突變可能導(dǎo)致Netherton綜合征，這是一種以魚鱗病、有缺陷的角質(zhì)化和特應(yīng)性為特征的疾病。

中間絲相關(guān)蛋白(filaggrin，F(xiàn)LG)基因編碼中間絲相關(guān)蛋白，主要的蛋白成分為角蛋白和中間絲相關(guān)蛋白，大約占到80％-90％。中間絲相關(guān)蛋白在皮膚屏障功能中起重要作用，它將最外層皮膚細胞中的結(jié)構(gòu)蛋白結(jié)合在一起，形成緊密的束狀物，使細胞平坦化和強化，形成強大的屏障，在維持表皮屏障的通透性，調(diào)節(jié)皮膚正常pH值，防御微生物對皮膚的侵犯等都起重要作用。

微粒體環(huán)氧化物水解酶(epoxide hydrolase 1，EPHX1)基因編碼合成環(huán)氧化水解酶，環(huán)氧化物水解酶是一種關(guān)鍵的生物轉(zhuǎn)化酶，可將環(huán)氧化物(環(huán)氧化物是高活性的親電子化合物，與DNA和蛋白質(zhì)形成加合物，并且還會導(dǎo)致DHA中的鏈斷裂；因此，環(huán)氧化物可導(dǎo)致基因突變，癌癥和關(guān)鍵蛋白的失活)從芳香族化合物的降解轉(zhuǎn)化為反式二氫二醇(通常沒有毒性或毒性遠低于它們的環(huán)氧化物前體)，反式二氫二醇可從體內(nèi)結(jié)合并排出體外。環(huán)氧化物水解酶在環(huán)氧化物的活化和解毒中起作用。

發(fā)明內(nèi)容