[發(fā)明專利]一種快速檢測遺傳性皮膚敏感基因的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201811078422.5 | 申請日： | 2018-09-10 |
| 公開（公告）號： | CN109182476A | 公開（公告）日： | 2019-01-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王亮;趙紹軍;蔣桂瑾 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣州益養(yǎng)生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6858 | 分類號： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 510000 廣東省廣州市國際生物島螺旋*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 快速檢測 敏感基因 遺傳性 檢測 分子生物學(xué)領(lǐng)域 皮膚 熔解曲線分析 標準基因型 待檢測樣本 待檢測樣品 特異性引物 高分辨率 基因型 突變型 野生型 雜合型 位點 突變 分析 基因 | ||
1.一種快速檢測遺傳性皮膚抗氧化基因的方法，其特征在于包括以下步驟：
1)設(shè)計4對特異性引物，并確定各引物對的擴增條件；
2)制備4組含三種不同基因型的標準品；
3)將待檢測樣品總DNA的濃度稀釋至20ng/μL作為模板；
4)使用上述步驟中的引物及模板，借助HRM技術(shù)對各基因片段進行特異性擴增并測定其溶解曲線；
5)根據(jù)4)中的實驗結(jié)果，依據(jù)與標準品的線型關(guān)系判斷樣品的基因型。
2.如專利要求1所述的4對引物，其特征為下表所示：
3.如權(quán)利要求1所述的5組標準品制備，其特征在于：
1)通過PCR擴增篩選得到野生型及突變型基因(若突變型基因不易篩選可進行化學(xué)合成法)；
2)將篩選所得的基因(野生型及突變型)連接到克隆常用質(zhì)粒中，將連接后質(zhì)粒進行轉(zhuǎn)化擴增，最后回收連接成功的質(zhì)粒(并將相應(yīng)菌落進行菌種保存)；
3)將連接有兩種基因型的質(zhì)粒進行定量稀釋處理，同時取兩種不同質(zhì)粒1∶1混合即可得到突變雜合型模板。將這三種質(zhì)粒進行定量處理，并取其中一部分稀釋為工作濃度在后續(xù)實驗中作為標準品DNA使用。
4.如專利要求1所述的特異性擴增體系與條件，其特質(zhì)為下表：
擴增體系：
序號 試劑 體積(μl) 1 ①2×Master Mix 10 2 2(25mM)]]> 2.4 3 Primer 16F 0.4 4 Primer 16R 0.4 5 2O]]> 4.8
擴增條件：
5.如權(quán)利要求1中所述根據(jù)試驗結(jié)果判斷樣品的基因型，其特征在于：使用LightCycler 480 software軟件對樣品的突變位點進行溶解曲線進行線型分析，與三種標準品進行對比分析樣品的基因型，同時，擴增后的樣本仍可進行測序分析以驗證實驗結(jié)果的真實性。
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