[發明專利]用于同時檢測地中海貧血基因突變型與缺失型的試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201811076309.3
• 申請日: 2018-09-14
• 公開（公告）號: CN108796054A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發明（設計）人: 張彩芬;楊曉琴;方俊彬;周梅珍;陳仕平;陳文景;柴相花;劉碧湘;張禮茗;黃曉燕;褚仲杰;李映霞;梁碧珊;嚴紅;梁英敏;程征宇;林佳;張紅云;李云;宋海峰
• 申請（專利權）人: 華大生物科技（武漢）有限公司;深圳華大臨床檢驗中心
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12N15/11;C40B50/06;C40B40/06
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 趙天月

本發明公開了一種用于同時檢測地中海貧血基因突變型與缺失型的試劑盒及其應用。其中該試劑盒包含多個用于擴增地中海貧血基因的擴增引物組，所述擴增引物組包括針對α珠蛋白基因和β珠蛋白基因設計的引物，其中，所述擴增引物組包括針對HBA1基因、HBA2基因、HBB基因的突變型檢測引物，以及針對α地貧缺失型–α3.7、–α4.2、??SEA、??THAI，以及β缺失型SEA?HPFH、中國型、中國臺灣型的缺失型檢測引物。利用該試劑盒能夠同時檢測地貧缺失型與突變型，具體地能夠同時檢測常見的7種缺失型與超過300種突變類型，并可以發現新的突變類型，且成本低廉，相對于現有地貧檢測試劑盒優勢顯著。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，具體而言，涉及一種用于同時檢測地中海貧血基因突變型與缺失型的試劑盒及其應用。

背景技術

地中海貧血(在本文中有時簡稱“地貧”)是一種常見的溶血性單基因遺傳病，多發于中東、中亞、非洲、東南亞和中國南方等地區。導致地貧的分子機理是：珠蛋白基因發生缺陷使其編碼的肽鏈一種或幾種合成減少或缺失，致使血紅蛋白的組成成分比例失衡，進而導致血紅蛋白不穩定。

根據缺陷的珠蛋白基因種類不同，地貧主要分為α地貧和β地貧。α地貧是由于α珠蛋白基因的缺失或者突變導致α珠蛋白肽鏈合成受到抑制而引起的溶血性貧血疾病。α珠蛋白基因簇位于16p13.3，每條染色體各有2個α珠蛋白基因，一對染色體共有4個α珠蛋白基因。α珠蛋白基因的缺失或突變是產生α地貧的最常見原因，α地貧主要包括缺失型和非缺失型。β地貧是由于β珠蛋白基因突變導致β珠蛋白肽鏈缺陷或合成不足而引起的遺傳性溶血性貧血疾病。β珠蛋白基因位于β珠蛋白基因簇，該基因簇定位于染色體11p15，β地貧的分子病理具有高度異質性，主要為β珠蛋白基因點突變、小的缺失或插入。

地貧患者長期貧血會導致臟器功能減退、導致心功能衰竭、肝脾腫大等，影響患者的生長發育，目前國內外尚無有效的治療方法，只能通過定期輸血等方法維持生命，給患者自身及家庭和社會帶來沉重的負擔。因而，控制地貧，預防是關鍵，通過對地貧高發人群的地貧篩查和婚育指導可有效降低重型地貧的發生率。目前地貧有多種篩查方法，但基因檢測是診斷地貧的金標準，基因檢測能夠大大提高地貧檢測的準確性，減少地貧的漏檢率，這對地貧的診治和預防有重要意義。

然而，據珠蛋白數據庫統計，全球已發現地貧類型超過400種，我國常規檢測23-27種的地貧檢測技術存在約2％-5％的漏檢。因而，目前用于地貧基因檢測的方法和試劑盒仍有待改進。

發明內容

首先，需要說明的是，本發明是基于發明人的下列發現和工作而完成的：

發明人針對目前的地貧基因檢測方法和試劑盒進行了一系列的理論研究和實驗探索，結果發現：

目前地貧分子診斷的方法有很多，利用高通量測序技術檢測地貧突變型的方法亦有報道。這些地貧常用基因檢測方法及其優缺點如下表所示：

目前市售的地貧檢測試劑盒主要有下列3種：

(1)中山大學達安基因股份有限公司的“地中海貧血(α/β型)基因檢測試劑盒(PCR-流式熒光雜交法)”，用于定性檢測全血樣本中的α-珠蛋白基因3種缺失(--SEA、-α3.7和-α4.2)、3種突變(WS122、QS125和CS142)及β-珠蛋白基因17種突變(CD41-42、IVS-2-654、CD17、-28、CD26、CD71-72、CD43、 -29、Int、CD14-15、CD27-28、-32、-30、IVS-1-1、IVS-1-5、CD31和Cap)；