[發(fā)明專利]用于同時檢測地中海貧血基因突變型與缺失型的試劑盒及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811076309.3
• 申請日: 2018-09-14
• 公開（公告）號: CN108796054A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張彩芬;楊曉琴;方俊彬;周梅珍;陳仕平;陳文景;柴相花;劉碧湘;張禮茗;黃曉燕;褚仲杰;李映霞;梁碧珊;嚴(yán)紅;梁英敏;程征宇;林佳;張紅云;李云;宋海峰
• 申請（專利權(quán)）人: 華大生物科技（武漢）有限公司;深圳華大臨床檢驗中心
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12N15/11;C40B50/06;C40B40/06
• 代理公司: 北京清亦華知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201
• 代理人: 趙天月

1.一種用于同時檢測地中海貧血基因突變型與缺失型的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含多個用于擴增地中海貧血基因的擴增引物組，其中所述多個包括1個的情形，

所述擴增引物組包括針對α珠蛋白基因和β珠蛋白基因設(shè)計的引物，

其中，所述擴增引物組包括針對HBA1基因、HBA2基因、HBB基因的突變型檢測引物，以及針對α地貧缺失型–α3.7、–α4.2、--SEA、--THAI，以及β缺失型SEA-HPFH、中國型、中國臺灣型的缺失型檢測引物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述擴增引物組的引物序列如SEQ IDNO：1-27所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，在所述試劑盒中，SEQ ID NO：1-27所示的引物被分為如下所示的5個引物組：

，

其中，5個引物組分開放置，而針對每個引物組，其引物混合放置。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的試劑盒，其特征在于，在所述試劑盒中，所述擴增引物組的每條引物的5’端均添加有引物標(biāo)簽序列，且在每個擴增引物組內(nèi)，引物組1、引物組3、引物組4和引物組5的引物標(biāo)簽序列相同，并與引物組2的引物標(biāo)簽序列不同，而所述多個擴增引物組之間的所有引物標(biāo)簽序列相互不同，

任選地，所述引物標(biāo)簽序列的長度為5-10bp，優(yōu)選7bp，

任選地，針對每個擴增引物組，引物組1、引物組3、引物組4和引物組5攜帶相同的引物標(biāo)簽序列，且所述引物標(biāo)簽序列為選自下列的任意之一：

任選地，針對每個擴增引物組，引物組2的引物標(biāo)簽序列為選自下列的任意之一：

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，每個擴增引物組中各引物的重量份數(shù)如下表所示：

6.一種用于同時檢測地中海貧血基因突變型與缺失型的測序文庫的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：

利用權(quán)利要求1-5任一項所述的試劑盒中的多個擴增引物組，分別對多個待測樣本進(jìn)行PCR擴增，以便獲得多個待測樣本的PCR產(chǎn)物，其中，各擴增引物組的每條引物的5’端均添加有引物標(biāo)簽序列，且在每個擴增引物組內(nèi)，引物組1、引物組3、引物組4和引物組5的引物標(biāo)簽序列相同，并與引物組2的引物標(biāo)簽序列不同，而各擴增引物組之間的所有引物標(biāo)簽序列相互不同，以便使所述多個待測樣本的PCR產(chǎn)物的引物標(biāo)簽序列相互不同；以及

將所述多個待測樣本的PCR產(chǎn)物混合，以便獲得所述用于同時檢測地中海貧血基因突變型與缺失型的測序文庫，

任選地，將所述多個待測樣本的PCR產(chǎn)物混合后進(jìn)一步包括：混合PCR產(chǎn)物打斷、末端修復(fù)、加“A”、接頭連接、片段篩選的步驟，

任選地，在所述多個待測樣本的PCR產(chǎn)物混合之后，以及混合PCR產(chǎn)物打斷、末端修復(fù)、加“A”、接頭連接和片段篩選的至少一個步驟之后進(jìn)一步包括對產(chǎn)物進(jìn)行純化的步驟，

任選地，所述接頭為標(biāo)簽接頭，

任選地，針對多個測序文庫使每個測序文庫的標(biāo)簽接頭的標(biāo)簽序列相互不同，以便將分別攜帶不同文庫標(biāo)簽的多個測序文庫混合形成能夠同時上機測序的混合測序文庫，

任選地，所述片段篩選步驟回收的DNA片段長度為180bp-600bp。