[發明專利]一株戊糖片球菌菌株、其微生態制劑及其制備方法

在審

• 申請號: 201811076159.6
• 申請日: 2018-09-14
• 公開（公告）號: CN109439565A
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發明（設計）人: 夏立秋;龔亮;丁學知;胡勝標;孫運軍;李東杰
• 申請（專利權）人: 湖南師范大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K10/18;A23K50/80;C12R1/01
• 代理公司: 長沙星耀專利事務所(普通合伙) 43205
• 代理人: 寧星耀;寧岡

一株戊糖片球菌菌株、其微生態制劑及其制備方法，該菌株保藏于中國典型培養物保藏中心，菌種保藏號為CCTCC NO：M 2018109，分類命名為：戊糖片球菌SL001。由該菌株通過相應方法制成的適用水產養殖的微生態制劑混合于飼料后，對淡水魚類進行喂食，能快速抑制嗜水氣單胞菌等魚類病原菌對草魚、鯽魚等淡水魚類的感染，其保護率≥70%，同時也能改善淡水魚類腸道菌群結構、促進淡水魚類的生長、提高淡水魚類的免疫力。

技術領域

本發明涉及水產微生物技術領域，具體涉及一株戊糖片球菌菌株、其微生態制劑及其制備方法。

背景技術

我國養殖水域面積遼闊，隨著人們對蛋白資源食物的需求增大，水產養殖行業的發展越來越受到重視。根據《中國水產養殖市場調查與發展前景研究報告（2018年版）》顯示，我國水產養殖以淡水養殖為主，其產量占比超過60%，淡水養殖以魚類為主，占淡水養殖總產量的88%以上。近年來，隨著國家對農業環境保護的重視，水產精養魚池面積迅速擴展，相應精養魚池的病害爆發越來越嚴重，成為制約魚類水產養殖可持續發展的技術瓶頸。

目前，已報道的淡水魚類病害主要以細菌性病害為主，尤為嚴重的是，嗜水氣單胞菌病害導致魚類減產損失嚴重，近兩年暴發率達50%以上，魚類減產損失率達20%～30%，每年造成的直接經濟損失超過百億元之巨。

現有淡水養殖魚類病害的防控技術措施，主要是利用抗生素、化學藥物、益生菌和疫苗，其中使用化學藥物是魚類病害防控的主要手段，雖然有一定效果，但是，化學藥物的長期大量使用會導致病原菌產生耐藥性，影響生態環境和導致水產品農藥殘留。益生菌是微生物中的一大類，其生長繁殖速度快，周期短，而且在生長過程中能產生一些代謝產物，這些代謝產物能抑制病原菌的繁殖，和病原菌達到某種生態和微生態平衡，同時某些代謝產物能促進魚類生長。疫苗在水產養殖病害防治中效果也較佳，目前我國用的最多的是滅活疫苗，現階段疫苗的制備造價和如何對水產動物進行免疫，一直是大量推廣使用的瓶頸。

目前，水產養殖行業常用的微生態制劑益生菌有芽胞桿菌、乳酸菌、雙歧桿菌、酵母菌等，由于芽胞桿菌的芽胞具有耐高溫、耐酸堿等優勢，使得芽孢桿菌加工更方便，應用范圍更廣。乳酸菌能夠產生有機酸、過氧化氫、雙乙酰、細菌素等，是魚類病原菌的天然抑菌產物，同時乳酸菌還能產生益生元，促進動物體生長發育。乳酸菌作為腸道益生菌，它能定殖在動物腸壁上，恢復和增強腸道穩態發揮作用，從而起到維持宿主免疫穩態、幫助宿主拮抗病原微生物和促進宿主對營養物質的吸收作用，進而達到促進動物生長，防治疾病的目的。

戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）作為乳酸菌的一種，屬于乳桿菌科、片球菌屬，是一種典型的乳酸菌，可以發酵糖產酸以及IIa類片球菌素等物質，具有殺滅病原菌及腐敗微生物的功能。近年來，乳酸菌類戊糖片球菌作為微生態制劑在國際上養殖領域受到高度重視。2013年，中華人民共和國農業部第2045號公告《飼料添加劑品種目錄(2013)》中規定，戊糖片球菌是可作為微生態制劑直接飼喂養殖動物的飼料級微生物添加劑菌種。

CN 102132788 B公開了一種水產養殖用橙色粘球菌微生態制劑的制備及應用方法，包括以下步驟：（1）取一株橙色粘球菌JCH-04，保藏號為CGMCCNo.2893，菌株在CY 培養基上30℃培養3 天，在發酵培養基中30℃、180rpm搖瓶培養5 天；（2）從斜面挑取一環菌種接種于CY 液體培養基中試管30℃培養3 天，再將接種于裝有發酵培養基試管中30℃培養3天；（3）將步驟（2）的液體菌種接種于裝有發酵培養基三角瓶中30℃、180rpm 搖瓶培養5天；（4）將步驟（3）的搖瓶培養菌液用0.2μm 微濾膜過濾濃縮成500 億CFU/mL 菌液，獲得的濃縮菌液為微生態制劑，對該微生態制劑的穩定性并沒有提及。

現有微生態制劑在運輸、使用和保存過程中易失活，穩定性差，從而降低其生物活性作用；有些菌株進入消化道后，不能有效抵抗鹽酸、膽汁酸等的作用，從而無法長時間定植腸道發揮功能；微生態制劑預防效果好于治療效果，但作用慢，需長時間連續使用，成本相應增加等不利因素和技術制約。