[發明專利]一種豬非典型瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201811075364.0
• 申請日: 2018-09-14
• 公開（公告）號: CN109187952A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發明（設計）人: 徐保娟;崔曉霞;孫厚民;王麗萍;宮曉;郭偉偉;李陸梅;郝堯光;王宗升;韓乃君;范根成;杜元釗
• 申請（專利權）人: 青島易邦生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535;G01N33/569
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發明的目的是提供一種豬非典型瘟病毒APPV抗體檢測ELISA試劑盒，以及一種豬非典型瘟病毒蛋白的生產方法，可以高效的表達豬非典型瘟病毒蛋白。本發明首先提供一種豬非典型瘟病毒蛋白的基因,能在大腸桿菌中高效表達豬非典型瘟病毒蛋白，該基因的核苷酸序列為SEQ ID NO.2；本發明再一個方面提供一種豬非典型瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒，包含有大腸桿菌表達的，氨基酸序列為SEQ ID NO:5的豬非典型瘟病毒E2蛋白作為抗原包被的ELISA板。本發明提供了大量制備豬非典型瘟病毒E2蛋白的方法，并提供了以豬非典型瘟病毒E2蛋白為抗原的ELISA抗體檢測試劑盒，該試劑盒具有較高的靈敏性、特異性、重復性，可以大規模推廣應用。

技術領域

本發明屬于疫苗檢測技術領域，具體涉及一種豬非典型瘟病毒 (APPV)抗體檢測ELISA試劑盒。

背景技術

豬非典型瘟病毒(APPV)是一種變異性極強的RNA病毒，可引 起仔豬先天性震顫，即臨床上俗稱的“抖抖病”，多見于第一胎母豬所 產仔豬，以雙側骨骼肌陣攣性收縮為特征，癥狀嚴重時可導致豬行走、 吃奶困難，常因初乳攝入不足和饑餓而死亡。該病毒可誘發多種病毒、 細菌的混合感染和繼發感染，給全球養豬業造成巨大的經濟損失。對 此病的研究，特別是對其疫苗的研究正日益受到關注。隨著我國養豬 業的發展，頭胎母豬新生仔豬受到豬非典型瘟病毒感染的危害日益嚴 重，因此研發一種快速、準確的APPV血清抗體檢測方法的需求愈發 迫切。

目前，臨床上對于APPV的檢測，目前主要是通過流行病學、臨 床癥狀和病理剖檢變化做出初步診斷，但APPV與CSFV等通過簡單 的臨床檢查、病理剖檢等手段難以確診。因此，該病的確診還需要附 以實驗室診斷。然而實驗室診斷例如間接免疫熒光、聚合酶鏈式反應、 病毒分離培養等方法，存在檢測耗時長、費用高、過程復雜、需要特 定的儀器設備，規模化推廣難度較高。因此，研發操作簡單、敏感性 高、特異性強的檢測試劑盒是檢測APPV的必要手段。

APPV E2囊膜糖蛋白是豬瘟病毒的主要結構蛋白,是豬瘟病毒毒 力及宿主范圍的主要決定性因素,位于病毒粒子外表面,有跨膜區,是建 立豬瘟病毒血清學檢測方法的主要抗原。因此,豬瘟病毒E2蛋白是開 發豬瘟病毒新型疫苗及診斷試劑的重要蛋白分子。為了更廣泛的利用 豬非典型瘟病毒蛋白，研究者將豬非典型瘟病毒E2蛋白基因克隆到 大腸桿菌中進行表達。但豬非典型瘟病毒E2蛋白在原核細胞中表達 效率很低，使E2蛋白作為檢測抗原應用范圍受到限制。

發明內容

本發明的目的是提供一種豬非典型瘟病毒(APPV)抗體檢測ELISA 試劑盒，以及一種豬非典型瘟病毒蛋白的生產方法，可以高效的表達 豬非典型瘟病毒蛋白，從而彌補現有技術的不足。

本發明首先提供一種豬非典型瘟病毒蛋白的基因,能在大腸桿菌 中高效表達豬非典型瘟病毒蛋白，該基因的核苷酸序列為SEQ ID NO.2；