[發(fā)明專利]一種甘蔗組織培養(yǎng)中外植體防褐化的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811074645.4
• 申請日: 2018-09-14
• 公開（公告）號(hào): CN108935107A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 武媛麗;楊本鵬;曹崢英;甘儀梅;張樹珍
• 申請（專利權(quán)）人: 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 北京眾合誠成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 夏艷

本發(fā)明公開了一種甘蔗組織培養(yǎng)中外植體防褐化的方法，將成熟甘蔗莖稈從上至下的9?15位芽經(jīng)消毒，用抗氧化劑浸泡后剝?nèi)∏o尖分生組織得到外植體，將外植體以MS+6?BA為基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)，即可有效抑制甘蔗外植體的褐化。本發(fā)明方法可有效防止甘蔗外植體褐化現(xiàn)象的產(chǎn)生，且不影響外植體的生長分化，是甘蔗健康種苗組織培養(yǎng)的一種有效方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種甘蔗組織培養(yǎng)中外植體防褐化的方法。

背景技術(shù)

甘蔗原產(chǎn)于熱帶、亞熱帶地區(qū)，是重要的糖料及能源作物，每年世界上總產(chǎn)量80％的蔗糖和40％的乙醇原料均來自于甘蔗。甘蔗系無性繁殖宿根栽培作物，易受甘蔗花葉病，宿根矮化病及黃葉病等的病原物反復(fù)侵害，使得品種退化，產(chǎn)量及含糖量下降。為了使優(yōu)良品種的種性得以恢復(fù)，構(gòu)建了甘蔗綜合脫毒技術(shù)體系，用此技術(shù)體系所示的方法所生產(chǎn)的甘蔗脫毒健康種苗可以完全脫除以上病原菌并使甘蔗增產(chǎn)20-40％，蔗糖含量提高0.5-1.0％。此項(xiàng)技術(shù)體系中，甘蔗的組織培養(yǎng)是甘蔗脫毒健康種苗生產(chǎn)成功與否的關(guān)鍵因素之一，但是在甘蔗組織培養(yǎng)的過程中，外植體褐化現(xiàn)象普遍存在，嚴(yán)重影響外植體分化，嚴(yán)重的甚至導(dǎo)致外植體死亡。

目前，甘蔗外植體防褐化技術(shù)研究的比較少，且多見于在培養(yǎng)基中添加抗氧化物質(zhì)，從而降低外植體的褐化率。秦昌鮮等2011年在“防止甘蔗組織培養(yǎng)褐化初探”一文中提出，在培養(yǎng)基中添加生物素和硅酸鈉，可推遲甘蔗外植體褐化出現(xiàn)時(shí)間，減輕褐化程度。吳轉(zhuǎn)娣等2013年在“甘蔗胚性愈傷組織的誘導(dǎo)和抗褐化研究”中指出，在培養(yǎng)基中加入PVP或活性炭，能夠有效減輕甘蔗組織的酚害，進(jìn)而降低外植體褐化率。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明針對現(xiàn)有甘蔗組織培養(yǎng)過程中，外植體存在褐化現(xiàn)象的問題，提供了一種甘蔗組織培養(yǎng)中外植體防褐化的方法。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明公開了一種甘蔗組織培養(yǎng)中外植體防褐化的方法，將成熟甘蔗莖稈從上至下的9-15位芽經(jīng)消毒，用抗氧化劑浸泡后剝?nèi)∏o尖分生組織得到外植體，將外植體以MS+6-BA為基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)，即可有效抑制甘蔗外植體的褐化。

進(jìn)一步地，所述外植體的采集步驟包括：選取生長健壯、無病蟲害的成熟甘蔗莖稈，剝?nèi)ネ馊~鞘，截取從上至下9-15位間的單芽，52℃水浴30min后，38-40℃恒溫培養(yǎng)，待腋芽長至8-12cm，將其切下，經(jīng)消毒及抗氧化處理后，在無菌水或1％的無菌檸檬酸溶液中剝?nèi)∏o尖1-2mm分生組織，即得到所述甘蔗外植體。

進(jìn)一步地，所述消毒方法為：先用無菌水清洗1-2次，用濾紙吸干水分后放入體積濃度為70-75％酒精中浸泡0.5-1min，之后放入加有2-3d、0.1％吐溫20的0.1％升汞溶液中處理10-15min，期間攪拌3-4次，最后用無菌水清洗3-4次。

進(jìn)一步地，采用抗氧化劑浸泡時(shí)間為15-30min。

進(jìn)一步地，所述抗氧化劑為聚乙烯吡咯烷酮、抗壞血酸、硫代硫酸鈉、亞硫酸鈉、檸檬酸或磷酸丁脂中的一種。

進(jìn)一步地，所述MS+6-BA培養(yǎng)基為：將1mg/L6-BA加入到MS培養(yǎng)基中，調(diào)節(jié)pH至5.8，121℃下高壓蒸汽滅菌20-25min即得。

進(jìn)一步地，所述MS培養(yǎng)基為：硝酸鉀1.9g/L，硝酸銨1.65g/L，七水合硫酸鎂0.37g/L，磷酸二氫鉀0.17g/L，氯化鈣0.332g/L，四水合硫酸錳22.3mg/L，七水合硫酸鋅8.6mg/L，硼酸6.2mg/L，碘化鉀0.83mg/L，二水合鉬酸鈉0.25mg/L，五水合硫酸銅0.25mg/L，六水合氯化鈷0.025mg/L，乙二胺四乙酸二鈉3.73mg/L，七水合硫酸亞鐵2.78mg/L，甘氨酸0.2mg/L，維生素B1 0.05mg/L，維生素B6 0.1mg/L，煙酸0.05mg/L，肌醇0.01g/L。

進(jìn)一步地，所述6-BA為：6-芐基腺嘌呤1mg/L。