[發明專利]一種甘蔗組織培養中外植體防褐化的方法

在審

• 申請號: 201811074645.4
• 申請日: 2018-09-14
• 公開（公告）號: CN108935107A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 武媛麗;楊本鵬;曹崢英;甘儀梅;張樹珍
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 夏艷

1.一種甘蔗組織培養中外植體防褐化的方法，其特征在于，將成熟甘蔗莖稈從上至下的9-15位芽經消毒，用抗氧化劑浸泡后剝取莖尖分生組織得到外植體，將外植體以MS+6-BA為基礎培養基培養，即可有效抑制甘蔗外植體的褐化。

2.根據權利要求1所述的甘蔗組織培養中外植體防褐化的方法，其特征在于，所述外植體的采集步驟包括：選取生長健壯、無病蟲害的成熟甘蔗莖稈，剝去外葉鞘，截取從上至下9-15位間的單芽，52℃水浴30min后，38-40℃恒溫培養，待腋芽長至8-12cm，將其切下，經消毒及抗氧化處理后，在無菌水或1％的無菌檸檬酸溶液中剝取莖尖1-2mm分生組織，即得到所述甘蔗外植體。

3.根據權利要求1或2所述的甘蔗組織培養中外植體防褐化的方法，其特征在于，所述消毒方法為：先用無菌水清洗1-2次，用濾紙吸干水分后放入體積濃度為70-75％酒精中浸泡0.5-1min，之后放入加有2-3d、0.1％吐溫20的0.1％升汞溶液中處理10-15min，期間攪拌3-4次，最后用無菌水清洗3-4次。

4.根據權利要求3所述的甘蔗組織培養中外植體防褐化的方法，其特征在于，采用抗氧化劑浸泡時間為15-30min。

5.根據權利要求3所述的甘蔗組織培養中外植體防褐化的方法，其特征在于，所述抗氧化劑為聚乙烯吡咯烷酮、抗壞血酸、硫代硫酸鈉、亞硫酸鈉、檸檬酸或磷酸丁脂中的一種。

6.根據權利要求1所述的甘蔗組織培養中外植體防褐化的方法，其特征在于，所述MS+6-BA培養基為：將1mg/L 6-BA加入到MS培養基中，調節pH至5.8，121℃下高壓蒸汽滅菌20-25min即得。

7.根據權利要求1或6所述的甘蔗組織培養中外植體防褐化的方法，其特征在于，所述MS培養基為：硝酸鉀1.9g/L，硝酸銨1.65g/L，七水合硫酸鎂0.37g/L，磷酸二氫鉀0.17g/L，氯化鈣0.332g/L，四水合硫酸錳22.3mg/L，七水合硫酸鋅8.6mg/L，硼酸6.2mg/L，碘化鉀0.83mg/L，二水合鉬酸鈉0.25mg/L，五水合硫酸銅0.25mg/L，六水合氯化鈷0.025mg/L，乙二胺四乙酸二鈉3.73mg/L，七水合硫酸亞鐵2.78mg/L，甘氨酸0.2mg/L，維生素B1 0.05mg/L，維生素B6 0.1mg/L，煙酸0.05mg/L，肌醇0.01g/L。

8.根據權利要求7所述的甘蔗組織培養中外植體防褐化的方法，其特征在于，所述6-BA為：6-芐基腺嘌呤1mg/L。

9.根據權利要求8所述的甘蔗組織培養中外植體防褐化的方法，其特征在于，所述培養的條件為：第1周為暗培養階段：pH 5.8-6.0，光照強度0μmol/(m².s)，溫度28-30℃，第2周為光培養階段：pH5.8-6.0，光照強度100-120μmol/(m².s)，光照時間12h/天，溫度28-30℃。