[發明專利]一種槲皮素糖苷的生物合成方法

有效

• 申請號: 201811073927.2
• 申請日: 2018-09-14
• 公開（公告）號: CN109234337B
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發明（設計）人: 賈紅華;李艷;蔡如鑫;嚴明;陳可泉
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: C12P19/18
• 分類號: C12P19/18;C12P19/60
• 代理公司: 南京新慧恒誠知識產權代理有限公司 32424
• 代理人: 王月霞

1.一種槲皮素糖苷的生物合成方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）構建含雙酶體系的重組菌：將糖基轉移酶UGT73G1突變體的基因與蔗糖合酶基因連接得到重組質粒，采用熱激法將連接產物轉化到大腸桿菌BL21（DE3）感受態細胞中，得到含雙酶體系的重組菌；

2) 重組菌的發酵誘導產酶：將重組菌接種于LB液體培養基中，25~40℃，培養至OD600達到2-3時，添加誘導劑乳糖至終濃度0.25~1g/L，20~37℃，150~300r/min條件誘導12~20h，發酵液離心收集菌體，菌體破碎，離心收集上清液得到粗酶液；

3）將槲皮素或異槲皮素溶于DMSO中，加入粗酶液、蔗糖，20-40℃條件下反應8-30h，加入甲醇終止反應，離心得上清槲皮素-3，4’-二葡萄糖糖苷；

其中，所述糖基轉移酶UGT73G1突變體的氨基酸序列是SEQ ID NO:1所示序列發生V371A和/或F381Y突變的氨基酸序列。

2.根據權利要求1所述的槲皮素糖苷的生物合成方法，其特征在于，誘導劑乳糖的終濃度為1g/L，誘導時間為20h。

3.根據權利要求1所述的槲皮素糖苷的生物合成方法，其特征在于，槲皮素或異槲皮素溶于DMSO中濃度為1g/L；蔗糖濃度為10g/L；粗酶液加入量為8mg/ml。

4.一種適用于槲皮素糖苷合成的糖基轉移酶突變體，糖基轉移酶突變體的氨基酸序列是SEQ ID NO:1所示發生突變的氨基酸序列，突變的氨基酸位點選自V371及F381中的一個或兩個。

5.一種表達基因，該基因編碼權利要求4所述的糖基轉移酶突變體。

6.一種重組質粒，該重組質粒連接有權利要求5所述的表達基因和蔗糖合酶基因，所述蔗糖合酶基因序列如SEQ ID:7所示。

7.一種重組細胞，該重組細胞包含權利要求6的重組質粒或權利要求5的表達基因。