[發明專利]一種布魯氏菌抗體競爭AlphaLISA檢測試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 201811072806.6
• 申請日: 2018-09-14
• 公開（公告）號: CN109116035A
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發明（設計）人: 吳勝昔;曾政;黃恒;李俊萱;黃誠;李志;徐緣;李令臣;魯友銘;侯力嘉;曹蕓;董春霞
• 申請（專利權）人: 重慶理工大學;重慶市動物疫病預防控制中心
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 重慶博凱知識產權代理有限公司 50212
• 代理人: 張先蕓

本發明公開了一種布魯氏菌抗體競爭AlphaLISA檢測試劑盒及其檢測方法，該試劑盒包括布魯氏菌OMP16蛋白單克隆抗體、山羊抗小鼠IgG偶聯的受體微珠、帶有His標簽的布魯氏菌OMP16蛋白抗原和鎳螯合的供體磁珠。采用基因工程技術制備了布魯氏菌OMP16外膜蛋白，采用PEG1500細胞融合技術制備了布魯氏菌OMP16蛋白單克隆抗體，將純化后的重組OMP16蛋白作為抗原和制備的單克隆抗體間的相互作用，通過樣品中抗體與單克隆抗體競爭性結合重組OMP16蛋白，建立競爭性布魯氏菌抗體AlphaLISA的檢測方法。該檢測方法檢測時間短，特異性好，靈敏度高，不需洗滌，操作簡便，檢測成本低。

技術領域

本發明涉及獸醫學、免疫學及生物制品學領域，特別的涉及一種布魯氏菌抗體競爭AlphaLISA檢測試劑盒及其檢測方法。

背景技術

布魯氏菌病(Brucellosis)簡稱布病，是由布魯氏菌引起的一種目前世界上流行最廣，危害最大的人獸共患病之一。它以流產、發熱、關節損傷為特征，威脅著人和60余種哺乳動物的生命健康。《中華人民共和國動物防疫法》、《國家中長期動物疫病防治規劃(2012-2020年)》、《重慶市動物防疫條例》、《重慶市中長期動物疫病防治規劃(2012-2020)》都規定了應對布病進行及時控制。因此，早期、快速、準確地診斷該病是防控和凈化該病的關鍵。

目前，現有的布病實驗室診斷技術標準有：虎紅平板凝集實驗(RBT)、試管凝集試驗(SAT)、補體結合試驗(CFT)、間接酶聯免疫吸附試驗(IELISA)、競爭酶聯免疫吸附試驗(CELISA)和熒光偏振試驗(FPA)等。其中，RBT敏感性較高，常用于初篩方法，但其特異性較低；SAT特異性較高，常用于確診方法，但其敏感性較低，且容易受人為因素影響，耗時較長；CFT特異性高于SAT，是一種可靠的確診方法，但操作繁瑣，耗時耗力，不便于廣泛使用。世界動物衛生組織(OIE)指定國際貿易實驗包括RBT、CFT、間接酶聯免疫吸附試驗(IELISA)、競爭酶聯免疫吸附試驗(CELISA)、熒光偏振試驗(FPA)等。IELISA為高通量快速檢測方法，其敏感性比RBT高，且簡便易操作，缺點是特異性較低，不能排除交叉反應，因而常用于初篩方法；CELISA特異性高于IELISA，能有效排除交叉反應，同時能一定程度上區分野毒感染和疫苗免疫，但國家層面尚無關于該方法的任何技術標準；FPA在我國尚處于評價階段。可見研究一種快速檢測布魯氏菌病的診斷試劑以便對疫情進行現場及時監控，已經是目前畜牧生產中急需解決的問題。

光激化學發光免疫檢測技術(AlphaLISA，amplified luminescent proximityhomogeneous assay linked immunosorbent assay)是一種基于微珠的化學發光的新型均相檢測技術，與傳統的ELISA技術相比具有更高的敏感性、精確性、均一性、背景低、廣泛的動態檢測范圍，而且無需洗滌及樣本需求量極少等特點，非常便于快速篩選和自動化。近年來該技術已在醫學及分子生物學領域得到了廣泛的應用。該技術可適用于傳染病的病原、抗體檢測，滿足多種傳染病的診斷及高通量檢測需求。但針對布魯氏菌AlphaLISA檢測國內外鮮見報道。

發明內容

針對上述現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種布魯氏菌抗體競爭AlphaLISA檢測試劑盒及其檢測方法，解決目前還未有基于OMP16蛋白及單克隆抗體的布魯氏菌抗體AlphaLISA檢測的問題。

為了解決上述技術問題，本發明采用了如下的技術方案：一種布魯氏菌抗體競爭AlphaLISA檢測試劑盒，包括布魯氏菌OMP16蛋白單克隆抗體、山羊抗小鼠IgG偶聯的受體微珠、帶有His標簽的布魯氏菌OMP16蛋白抗原和鎳螯合的供體磁珠；所述受體微珠具有發光功能，所述供體磁珠具有感光功能；所述布魯氏菌OMP16蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

進一步，所述編碼所述布魯氏菌OMP16蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。