[發明專利]一種布魯氏菌抗體競爭AlphaLISA檢測試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 201811072806.6
• 申請日: 2018-09-14
• 公開（公告）號: CN109116035A
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發明（設計）人: 吳勝昔;曾政;黃恒;李俊萱;黃誠;李志;徐緣;李令臣;魯友銘;侯力嘉;曹蕓;董春霞
• 申請（專利權）人: 重慶理工大學;重慶市動物疫病預防控制中心
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 重慶博凱知識產權代理有限公司 50212
• 代理人: 張先蕓

1.一種布魯氏菌抗體競爭AlphaLISA檢測試劑盒，其特征在于，包括布魯氏菌OMP16蛋白單克隆抗體、山羊抗小鼠IgG偶聯的受體微珠、帶有His標簽的布魯氏菌OMP16蛋白抗原和鎳螯合的供體磁珠；所述受體微珠具有發光功能，所述供體磁珠具有感光功能；所述布魯氏菌OMP16蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根據權利要求1所述布魯氏菌抗體競爭AlphaLISA檢測試劑盒，其特征在于，所述編碼所述布魯氏菌OMP16蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一種應用權利要求1～2任一項所述布魯氏菌抗體競爭AlphaLISA檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

1)將山羊抗小鼠IgG偶聯的受體微珠和鎳螯合的供體磁珠分別用1×AlphaLISA稀釋劑將濃度稀釋至100μg/ml；

2)在反應板上分別設置陰性對照組和待檢測樣品組，向所述待檢測樣品組中每個孔加入5μL帶有His標簽的布魯氏菌OMP16蛋白抗原、5μL布魯氏菌OMP16蛋白單克隆抗體和5μL待測樣品；向所述陰性對照組中每個孔加入5μL帶有His標簽的布魯氏菌OMP16蛋白抗原、5μL布魯氏菌OMP16蛋白單克隆抗體和5μL去離子水；然后將所述反應板置于微量震蕩器上震蕩30～60s，混勻后置于25℃培養箱，孵育1h；

3)向步驟2)反應板中陰性對照組和待檢測樣品組的每個孔中分別加入5μL步驟1)制備的山羊抗小鼠IgG偶聯的受體微珠和鎳螯合的供體磁珠，然后將所述反應板置于微量震蕩器上震蕩30～60s，混勻后置于25℃培養箱，避光孵育1h；

4)將步驟3)反應后的反應板置于AlphaScreen/Lisa檢測儀上檢測信號值；當陰性對照組的檢測值大于待檢測樣品組檢測值的2倍時，即待檢測樣品中含有布魯氏菌抗體。

4.根據權利要求3所述布魯氏菌抗體競爭AlphaLISA檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，所述帶有His標簽的布魯氏菌OMP16蛋白抗原的工作濃度為0.5～10μg/ml；所述布魯氏菌OMP16蛋白單克隆抗體的工作濃度為0.5～25μg/ml。

5.根據權利要求4所述布魯氏菌抗體競爭AlphaLISA檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，所述帶有His標簽的布魯氏菌OMP16蛋白抗原工作濃度為1.25μg/ml；所述布魯氏菌OMP16蛋白單克隆抗體的工作濃度為2.5μg/ml。

6.根據權利要求3所述布魯氏菌抗體競爭AlphaLISA檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，所述AlphaScreen/Lisa檢測儀檢測時激發光波長為680nm，發射光檢測波長為615nm。