[發(fā)明專利]一種粳稻典染敗恢復(fù)系分子標(biāo)記高效輔助選擇方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811072234.1
• 申請(qǐng)日: 2018-09-14
• 公開（公告）號(hào): CN109486986B
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王先俱;張城;龐秀;姜偉;陳亞君;丁芬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 遼寧省水稻研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明公開一種粳稻典染敗恢復(fù)系分子標(biāo)記高效輔助選擇方法，包括以下操作步驟：(1)分別用引物標(biāo)記四個(gè)水稻親本的第一、十染色體恢復(fù)基因SSR，然后進(jìn)行擴(kuò)增，電泳，得到四個(gè)水稻親本的恢復(fù)系基因型；(2)將四個(gè)水稻親本之間雜交，然后得到F₂代群體恢復(fù)系基因分子標(biāo)記輔助選擇結(jié)果，在F₂代分離群體中分子標(biāo)記輔助選擇的恢復(fù)系泳道；(3)對(duì)F₄代進(jìn)行分子標(biāo)記輔助選擇。分子標(biāo)記輔助選擇在短時(shí)間內(nèi)選到的恢復(fù)系株數(shù)多、恢復(fù)類型廣，節(jié)省人力、物力、財(cái)力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子標(biāo)記應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種粳稻典染敗恢復(fù)系分子標(biāo)記高效輔助選擇方法。

背景技術(shù)

近年來(lái)，分子育種發(fā)展迅速，已在許多研究中成功地將遠(yuǎn)緣種或野生稻的有利基因?qū)雰?yōu)良的稻種資源。抗病分子育種是分子標(biāo)記輔助選擇成功的典范。獲得了自葉枯病水平和垂直抗性均有所提高的新品系；培育一批具Xa-21基因的抗白葉枯病恢復(fù)系；結(jié)合抗稻瘟病基因Pi25的遺傳圖譜，新增加與該基因緊密連鎖的分子標(biāo)記RM3330和A7，并結(jié)合分子標(biāo)記輔助選擇的結(jié)果，而采用目標(biāo)基因兩側(cè)連鎖的標(biāo)記同時(shí)進(jìn)行輔助選擇，則可以明顯提高分子標(biāo)記輔助選擇符合率。

在優(yōu)質(zhì)稻育種上，分子標(biāo)記輔助選擇也取得了許多成就，從控制稻米糊化溫度的alk基因和控制香味的fgr基因編碼區(qū)尋找插入缺失長(zhǎng)度多態(tài)性(InDel)位點(diǎn)，并開發(fā)出InDel標(biāo)記進(jìn)行輔助選擇育種。通過(guò)比較編碼BAD2的fgr基因序列和9311序列設(shè)計(jì)功能性STS標(biāo)記Aro，利用Aro標(biāo)記開展香味基因的分子標(biāo)記輔助選擇。水稻恢復(fù)基因的分子輔助選擇在國(guó)內(nèi)尚處于開發(fā)階段，具有較高的科學(xué)研究?jī)r(jià)值，是創(chuàng)新性極強(qiáng)的科學(xué)技術(shù)方法，是解決目前雜交稻發(fā)展難題的關(guān)鍵技術(shù)。

現(xiàn)有的技術(shù)缺點(diǎn)是通過(guò)表現(xiàn)型間接對(duì)基因型進(jìn)行選擇的，理論上，利用分子標(biāo)記可從DNA水平上直接鑒定基因型的差異，因此，避免了表現(xiàn)型推斷基因型不準(zhǔn)確的缺點(diǎn)。分子標(biāo)記輔助選擇克服了性狀表現(xiàn)型鑒定的困難：有些性狀的表現(xiàn)型鑒定相當(dāng)困難，恢復(fù)系無(wú)法從表性上鑒定出來(lái)，在度量技術(shù)上難度較大、程序繁瑣、周期長(zhǎng)、費(fèi)用高、效率低；通過(guò)測(cè)配鑒定后基因型與預(yù)想的差距較大。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種粳稻典染敗恢復(fù)系分子標(biāo)記高效輔助選擇方法。

本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。

一種粳稻典染敗恢復(fù)系分子標(biāo)記高效輔助選擇方法，包括以下操作步驟：

(1)分別用引物RM5629、引物RM10353標(biāo)記四個(gè)水稻親本晚輪422、R498、R527、C418的第一、十染色體恢復(fù)基因SSR，然后進(jìn)行擴(kuò)增，電泳，得到四個(gè)水 稻親本的恢復(fù)系基因型，R498的恢復(fù)系基因型為Rf1Rf1Rf10Rf10，R527的恢復(fù)系基因型為Rf1Rf1Rf10Rf10，C418的恢復(fù)系基因型為Rf10Rf10，晚輪422的恢復(fù)系基因型為Rf1Rf1Rf10Rf10；

(2)將四個(gè)水稻親本之間雜交晚輪422/R498、晚輪422/R527、C418/R498、C418/R527，然后得到F₂代群體恢復(fù)系基因分子標(biāo)記輔助選擇結(jié)果，在F₂代分離群體中分子標(biāo)記輔助選擇的恢復(fù)系泳道，基因型Rf1Rf1Rf10Rf10，因此在F₂代分離群體中的22個(gè)株系中選擇到2株帶有純合顯性恢復(fù)基因的恢復(fù)系；

(3)對(duì)F₄代進(jìn)行分子標(biāo)記輔助選擇，在F₄代分離群體中分子標(biāo)記輔助選擇的恢復(fù)系范圍擴(kuò)大了，具有純合基因型Rf1Rf1Rf10Rf10的有18株，因此在四代與二代分離群體相比較，選擇效率提高了9倍，其中RM5629引物的序列為：AGCTCAACTCGAGAACTCCC，RM10353引物的序列為：TTGTTAGTTGGCGAAAGGAA。