[發(fā)明專利]一種人脂肪干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811071100.8
• 申請日: 2018-09-13
• 公開（公告）號: CN109161521A
• 公開（公告）日: 2019-01-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄭桂純;陳志勝;趙姝燦;黃麗貞;張曉芳
• 申請（專利權(quán)）人: 佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 王國標(biāo)

1.一種人脂肪干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于包括如下操作步驟：

1)分離培養(yǎng)人脂肪干細(xì)胞：取人脂肪組織，PBS溶液清洗、離心處理5min，取下層脂肪組織，加入Ⅰ型膠原蛋白酶溶液消化，離心處理，去除上層油脂和下層膠原酶溶液，然后用PBS溶液重懸沉淀，吹散后用200目細(xì)胞濾網(wǎng)過濾，離心處理10min，棄上清，加入完全培養(yǎng)基重懸，接種于培養(yǎng)板中傳代培養(yǎng)；

2)條件培養(yǎng)基制備：取傳代培養(yǎng)中的P3至P6代次人脂肪干細(xì)胞，待人脂肪干細(xì)胞生長至75～85％培養(yǎng)基時，棄去培養(yǎng)基，PBS溶液清洗，加入無血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)48h后收集細(xì)胞培養(yǎng)基上清液，對上清液進(jìn)行離心處理20min，用0.22μm濾器過濾后獲得人脂肪干細(xì)胞條件培養(yǎng)基，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人脂肪干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于：步驟1)中所述完全培養(yǎng)基為含有10％胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)基。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人脂肪干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于：步驟2)中所述無血清培養(yǎng)基為含有雙抗的DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人脂肪干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于：步驟1)中所述Ⅰ型膠原蛋白酶溶液為等體積現(xiàn)配的預(yù)熱后濃度為0.1％的Ⅰ型膠原蛋白酶溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人脂肪干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于：步驟1)中所述消化的時間為60min，溫度為37℃。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人脂肪干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于：步驟1)中所述離心處理的離心速度為2000rpm。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人脂肪干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于：步驟2)中所述離心處理的離心速度為3000rpm。