[發明專利]一種靶向抗原特異性T細胞誘導其向記憶干性細胞分化的融合蛋白

有效

• 申請號: 201811069211.5
• 申請日: 2018-09-13
• 公開（公告）號: CN110894241B
• 公開（公告）日: 2022-01-18
• 發明（設計）人: 王盛典;李穎;叢艷妮
• 申請（專利權）人: 中國科學院生物物理研究所;北京品澤生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 北京市振邦律師事務所 11389
• 代理人: 李朝輝

1.一種融合蛋白，包含通過連接子相連接的細胞因子和T細胞表面受體分子結合拮抗劑或激動劑，其中，

所述細胞因子是IL-21；

所述T細胞表面受體分子結合拮抗劑或激動劑是PD-1抗體；

所述融合蛋白能夠誘導激活T細胞，同時將細胞因子靶向T細胞，誘導T細胞分化，增強T細胞功能，

其中編碼所述PD-1抗體的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示，編碼所述細胞因子IL-21的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；或

編碼所述PD-1抗體的核苷酸序列如SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示，編碼所述細胞因子IL-21的核苷酸序列如SEQ ID NO:19所示。

2.如權利要求1所述的融合蛋白，其中，

所述PD-1抗體抑制PD-1對PD-L1的結合；和/或

所述PD-1抗體抑制PD-1對PD-L1和PD-L2二者的結合；

所述PD-1抗體是單鏈抗體。

3.如權利要求2所述的融合蛋白，其中，所述PD-1單鏈抗體為二聚體單鏈抗體。

4.如權利要求1-3中任一項所述的融合蛋白，其特征在于所述結構域從氨基末端到羧基末端包含如下結構：

-X-Linker1-Y-

其中：

X是PD-1抗體，Y是細胞因子，Linker1是連接子。

5.如權利要求4所述的融合蛋白，其特征在于所述PD-1抗體從氨基末端到羧基末端包含如下結構：

V_H-Linker2-V_L

其中，V_H為PD-1單鏈抗體重鏈的可變區，V_L為抗體輕鏈的可變區，Linker2為連接子。

6.如權利要求5所述的融合蛋白，其特征在于所述融合蛋白在3’端還可以包括標簽序列。

7.如權利要求6所述的融合蛋白，其特征在于所述融合蛋白阻斷PD-L1與T細胞表面PD-1的結合，并將IL-21靶向腫瘤特異性T細胞，誘導T細胞的分化。

8.如權利要求7所述的融合蛋白，其特征在于編碼所述融合蛋白的核苷酸序列如SEQID NO:8或SEQ ID NO:20所示。

9.如權利要求8所述的融合蛋白，其特征在于所述融合蛋白在3’端還包括標簽序列，所述含有標簽序列的編碼融合蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:21所示。

10.如權利要求9所述的融合蛋白，其特征在于所述融合蛋白主要是同源二聚體形式。

11.一種多核苷酸，其編碼如權利要求1-10中任一項所述的融合蛋白。

12.一種表達載體，其包含與表達控制序列操作性連接的如權利要求11所述的多核苷酸。

13.一種宿主細胞，其包含權利要求12所述的表達載體。

14.如權利要求1-10任一項所述的融合蛋白的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

a)通過基因工程手段方法，將細胞因子編碼基因鏈接到PD-1抗體編碼基因的C末端，成為融合蛋白的編碼基因；

b)構建表達載體；

c)轉染細胞，進行蛋白表達和純化；

d)獲得所述融合蛋白。

15.一種藥物組合物，其包含權利要求1-10中任一項所述的一種或多種融合蛋白，以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑；

和/或，所述藥物組合物還包括其他抗癌藥物或腫瘤疫苗，所述融合蛋白可以和其他抗癌藥物或腫瘤疫苗聯合使用。