[發明專利]一種基于分子信標的熒光環介導等溫擴增方法

在審

• 申請號: 201811067779.3
• 申請日: 2018-09-13
• 公開（公告）號: CN109055500A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 黃留玉;劉威;黃思妺;劉寧偉;鄒大陽;董德榮;楊展;敖大;賀小明
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍疾病預防控制所
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;秦夢楠

1.一種用于熒光環介導等溫擴增的引物探針組合，由LAMP引物組合和分子信標探針LBP組成；所述LAMP引物組合由前引物F3、后引物B3、前內引物FIP、后內引物BIP和加速引物LB組成；

將加速引物LB人為劃分為LB-a區段和LB-b區段；分子信標探針LBP自上游至下游依次包括：LBP-b1區段、LBP-a區段和LBP-b2區段；LBP-a區段的核苷酸序列與LB-a區段的核苷酸序列相同；LBP-b1區段和LBP-b2區段反向互補；LBP-b1區段或LBP-b2區段的核苷酸序列與LB-b區段的核苷酸序列相同；

所述分子信標探針LBP，一個末端連接有熒光基團，另一個末端連接有熒光淬滅基團。

2.如權利要求1所述的引物探針組合，其特征在于：所述LBP-b1區段由6個核苷酸組成；所述LBP-a區段由12-13個核苷酸組成。

3.如權利要求2所述的引物探針組合，其特征在于：

所述前引物F3為如下(a1)或(a2)；

(a1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；

(a2)將序列1經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子；

所述后引物B3為如下(a3)或(a4)；

(a3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

(a4)將序列2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子；

所述前內引物FIP為為如下(a5)或(a6):

(a5)序列表的序列3所示的單鏈DNA分子；

(a6)將序列3經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列3具有相同功能的DNA分子；

所述后內引物BIP為如下(a7)或(a8):

(a7)序列表的序列4所示的單鏈DNA分子；

(a8)將序列4經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列4具有相同功能的DNA分子；

所述加速引物LF為如下(a9)或(a10):

(a9)序列表的序列5所示的單鏈DNA分子；

(a10)將序列5經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列5具有相同功能的DNA分子；

所述加速引物LB為如下(a11)或(a12):

(a11)序列表的序列6所示的單鏈DNA分子；

(a12)將序列6經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列6具有相同功能的DNA分子；

所述分子信標探針LBP為如下(b1)或(b2):

(b1)序列表的序列7所示的單鏈DNA分子；

(b2)將序列7經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列7具有相同功能的DNA分子。

4.權利要求1至3中任一所述的引物探針組合在制備試劑盒中的應用；所述試劑盒的功能為(c1)或(c2)：

(c1)檢測待測樣本是否為目標物；

(c2)檢測待測樣本中是否含有目標物。

5.含有權利要求1至3中任一所述的引物探針組合的試劑盒；所述試劑盒的功能為(c1)或(c2)：

(c1)檢測待測樣本是否為目標物；

(c2)檢測待測樣本中是否含有目標物。

6.權利要求5所述試劑盒的制備方法，包括將各條引物探針單獨包裝的步驟。

7.一種檢測待測樣本是否為目標物的方法，包括如下步驟：以待測樣本的基因組DNA或cDNA為模板，采用權利要求1至3中任一所述的引物探針組合進行熒光環介導等溫擴增，監測熒光信號，如果顯示陽性擴增曲線、待測樣本為或候選為目標物，如果不顯示陽性擴增曲線、待測樣本為或候選為非目標物。