[發明專利]檢測植物中茉莉酸含量以及茉莉酸和茉莉酸甲酯總含量的酶聯免疫吸附分析方法

在審

• 申請號: 201811066053.8
• 申請日: 2018-09-13
• 公開（公告）號: CN108828219A
• 公開（公告）日: 2018-11-16
• 發明（設計）人: 趙林川
• 申請（專利權）人: 蘇州科銘生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種檢測植物樣品中茉莉酸（JA）含量以及茉莉酸和茉莉酸甲酯（JAs）總含量的酶聯免疫吸附分析方法（ELISA）。其特點是運用雜交瘤技術，成功制備了一種對茉莉酸甲酯（MeJA）具有高靈敏度及高特異性的單克隆抗體，建立了以茉莉酸甲酯（MeJA）為檢測目標物的間接競爭ELISA。該方法檢測茉莉酸甲酯（MeJA）的靈敏度（IC₅₀值）為2.02 ng/mL，檢出限（LOD值）為0.20 ng/mL。本發明所建立的檢測植物樣品中茉莉酸類植物激素含量的方法具有高靈敏、高特異、快速、樣品用量小、高通量的特點，為深入研究茉莉酸類植物激素的生理效應等提供了強有力的分析檢測方法。

一、技術領域

本發明涉及一種檢測植物中茉莉酸(JA)含量以及茉莉酸和茉莉酸甲酯(JAs)總含量的酶聯免疫吸附分析方法(ELISA)，屬于分析化學的研究領域。

二、背景技術

以茉莉酸(jasmonic acid, JA)和茉莉酸甲酯(methyl jasmonate, MeJA)為典型代表的茉莉酸類植物激素(jasmonates, JAs)是一種新型天然植物生長調節劑，具有廣譜的生理效應，普遍存在于多種高等植物體內。作為天然的內源植物激素，JA和MeJA都可以控制信號轉導和調節生長，具有在分子、細胞、器官和個體等水平調節植物生長發育的多種生理效應。通過茉莉酸類激素(JAs)的響應轉錄因子的自身調節，JAs在植物次生代謝物的積累中起著重要作用，這些次生代謝物是藥物、食品添加劑和精細化學品的重要資源。此外，茉莉酸類激素(JAs)被認為在生物和非生物防御反應中起著關鍵作用，也參與了一些病原體引起的防御反應。已有研究表明，茉莉酸類信號分子可作為環境信號分子有效地介導植物對病原菌、食草動物及非生物脅迫等的防御反應，誘導一系列防御基因的表達、防御反應化學物質的合成，并調節植物的“免疫”和應激反應。JAs與其他植物信號分子的拮抗或協同相互作用可調節防御和應激響應基因表達，以響應生物和非生物脅迫。另外，茉莉酸類激素(JAs)對子葉氣孔發育具有一定的調控作用，其中子葉是促進植物與環境間氣體、水汽交換的重要通道。因此，作為內源性信號分子，茉莉酸類激素(JAs)生理效應在植物中極為復雜。

茉莉酸類激素(JAs)還可以作為外源激素使用，也可以通過形態學和生理變化的形式發揮抑制或促進（誘導）的各種作用。大多數外源性的JA或MeJA是合成的，而后者很容易從香水行業獲得，這無疑增加了JAs的商業價值。據報道，外源性MeJA的應用可以大大提高植物的防御能力，使植物抗咀嚼昆蟲的死亡率從80%降低到12%左右。外源JAs也參與調控水果蔬菜的營養質量，包括調控番茄紅素、花青素等一系列次生代謝物的含量。

但是，內源性JAs對植物生長的確切機制和作用有待進一步的發現和驗證。外源性JAs引起的內源性JAs的變化仍需探索，這對指導農業生產具有現實意義。然而，JAs在植物體內含量（μg ~ ng / g鮮重）很低和周圍雜質干擾很多，導致其分析方法的靈敏度受到限制。因此，建立一種特異性強、靈敏度高的內源性信號化合物測定方法具有重要的意義。隨著分離和分析技術的發展，各種定性和定量分析方法在JAs的分析方面得到了應用，包括放射免疫分析法(RIA)、酶聯免疫吸附分析法(ELISA)、高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質譜儀(GC/MS)、液相色譜-質譜聯用法(LC/MS)、液相色譜-質譜聯用法(LC/MS/MS)、超高效液相色譜-電噴霧-電離質譜聯用法(UPLC/ESI-MS)等等。與常規儀器法相比，免疫分析法價格低廉、操作簡單、方法靈敏，僅需要少量植物樣品，而且它有很強的抗干擾能力。

酶聯免疫吸附分析方法(ELISA)具有靈敏度高、特異性強、分析快速的優點，已經廣泛用于臨床、藥物、食品和環境等分析領域。到目前為止，有關植物中茉莉酸類激素的免疫分析方法的論文很少，也只有為數不多的儀器方法可做到同時檢測植物中茉莉酸和茉莉酸甲酯。本方法建立了高靈敏高特異測定植物中茉莉酸含量以及茉莉酸與茉莉酸甲酯總含量的以單克隆抗體為基礎的酶聯免疫吸附分析方法(ELISA)，為茉莉酸類植物激素的進一步研究奠定了堅實的基礎。

三、發明內容