[發(fā)明專(zhuān)利]嵌合抗原受體及其基因和重組表達(dá)載體、CD19-CD20雙靶向性的T細(xì)胞及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811062721.X
• 申請(qǐng)日: 2018-09-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109293781A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 伍志強(qiáng);韓為東;王瑤;佟川;張文英;王曉慧
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): C07K19/00
• 分類(lèi)號(hào): C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 北京潤(rùn)平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11283
• 代理人: 喬雪微;劉依云

本發(fā)明屬于腫瘤生物制品領(lǐng)域，具體地，涉及嵌合抗原受體及其基因和重組表達(dá)載體、CD19?CD20雙靶向性的T細(xì)胞及其應(yīng)用。所述嵌合抗原受體為CD20ScFv?L?CD19ScFv?CD8?CD137?CD3ζ，包括依次串聯(lián)的CD20ScFv、連接肽L、CD19ScFv、CD8的鉸鏈區(qū)和跨膜區(qū)、CD137的胞內(nèi)信號(hào)結(jié)構(gòu)域和CD3ζ的胞內(nèi)信號(hào)結(jié)構(gòu)域。在治療B細(xì)胞系惡性血液系統(tǒng)腫瘤時(shí)，本發(fā)明的嵌合抗原受體修飾的T細(xì)胞不僅能夠特異性識(shí)別僅有其中CD19抗原或CD20抗原單個(gè)靶點(diǎn)表達(dá)的腫瘤細(xì)胞，而且還可以識(shí)別CD19抗原和CD20抗原兩個(gè)靶點(diǎn)共表達(dá)的腫瘤細(xì)胞，較單靶點(diǎn)CAR T，雙靶點(diǎn)CAR T具有更強(qiáng)的抗腫瘤活性，避免低豐度抗原表達(dá)的瘤細(xì)胞產(chǎn)生免疫逃逸，從而降低復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于腫瘤生物制品領(lǐng)域，具體地，涉及一種嵌合抗原受體及其基因和重組表達(dá)載體、CD19-CD20雙靶向性的T細(xì)胞及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

以急性淋巴細(xì)胞白血病、急性髓系白血病、非霍奇金淋巴瘤等為代表的血液系統(tǒng)惡性腫瘤在我國(guó)的發(fā)病率有不斷增高趨勢(shì)，并且以中青年為主要患病群體，嚴(yán)重威脅著我國(guó)人口的健康與生命。盡管以化療、放療、造血干細(xì)胞移植、以及分子靶向藥物與治療性抗體為主的治療手段在很大程度上提高了疾病的緩解率，延長(zhǎng)了患者生存期，但20-50％的患者在緩解后復(fù)發(fā)，同時(shí)約有30％左右的患者對(duì)目前已有的誘導(dǎo)緩解手段存在原發(fā)性抵抗。針對(duì)這種情況，需要探索尋找新的有效治療策略。

CD19和CD20均在臨床水平被確認(rèn)為表達(dá)在大多數(shù)B細(xì)胞惡性腫瘤的特異性抗原，而在造血干細(xì)胞、血漿細(xì)胞和其他正常組織中不表達(dá)。CD19和CD20抗原與B細(xì)胞的生物特性密切相關(guān)，存在于B細(xì)胞成熟的各個(gè)階段。在B細(xì)胞增殖和分化中起重要的調(diào)節(jié)作用。而且，CD19和CD20分子在細(xì)胞膜上比較暴露，容易接近，與單克隆抗體結(jié)合后無(wú)顯著內(nèi)化及脫落，也不會(huì)因?yàn)榕c抗體的結(jié)合而發(fā)生抗原調(diào)變。因此CD19和CD20抗原是B細(xì)胞系血液系統(tǒng)腫瘤治療的理想靶點(diǎn)。

腫瘤免疫治療經(jīng)過(guò)多年的臨床前探索與臨床研究在近年取得了令人矚目的突破性進(jìn)展，尤其以PD-1抗體在治療實(shí)體瘤以及靶向CD19的嵌合抗原受體修飾T細(xì)胞(CAR T)在治療B細(xì)胞系惡性血液系統(tǒng)腫瘤中獲得了顯著的臨床突破，包括B-ALL(B-cell acutelymphoblastic leukemia，B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病)，NHL(non-Hodgkins lymphoma，非霍奇金淋巴瘤)，B-CLL(B-cell Chronic lymphocytic leukemia，B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血病)。

盡管2013年以來(lái)全球公開(kāi)報(bào)道的臨床數(shù)據(jù)顯示，針對(duì)CD19的CAR T治療可以使60-90％的復(fù)發(fā)難治性B-ALL患者獲得再次緩解，約50％的復(fù)發(fā)難治性NHL患者獲得疾病控制與緩解，但同時(shí)也暴露出了一些迫切需要對(duì)該療法進(jìn)行優(yōu)化與解決的問(wèn)題。從較長(zhǎng)期臨床效果觀察方面來(lái)講，最為突出的問(wèn)題是緩解之后的再次復(fù)發(fā)，如約40％左右的CD19-CAR T治療緩解后的B-ALL患者在6個(gè)月后會(huì)再次復(fù)發(fā)。究其復(fù)發(fā)的原因，其中最為常見(jiàn)的原因?yàn)榘锌乖瑿D19轉(zhuǎn)變?yōu)殛幮曰蛘咂渌硇汀?/p>

因此，目前的單靶點(diǎn)CAR T對(duì)B細(xì)胞系惡性血液系統(tǒng)腫瘤的抗腫瘤效果還有待提高，且治療后的復(fù)發(fā)率還有待進(jìn)一步降低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中CAR T對(duì)腫瘤治療過(guò)程中效率低和復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)高的缺陷，提供一種嵌合抗原受體及其基因和重組表達(dá)載體、工程化CD19和CD20雙靶向性的T細(xì)胞及其制備方法和應(yīng)用，嵌合抗原受體修飾的T細(xì)胞在治療B細(xì)胞系惡性血液系統(tǒng)腫瘤時(shí)，具有更強(qiáng)的抗腫瘤活性，且治療后顯著降低復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。

本發(fā)明的發(fā)明人在研究中意外發(fā)現(xiàn)，采用嵌合抗原受體CD20ScFv-L-CD19ScFv-CD8-CD137-CD3ζ修飾的T細(xì)胞治療血液系統(tǒng)腫瘤時(shí)，具有很強(qiáng)的殺瘤活性，且顯著降低治療后的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。