[發(fā)明專利]提高囊胚率的小鼠精子體外培養(yǎng)試劑盒及其使用方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811056268.1
• 申請日: 2018-09-11
• 公開（公告）號: CN109136172B
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄭波;于駿;李紅;吳亦波;沈聰;陳霞;楊慎敏
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州市立醫(yī)院
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073;C12N5/076
• 代理公司: 杭州君度專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 33240
• 代理人: 黃前澤

本發(fā)明公開了提高囊胚率的小鼠精子體外培養(yǎng)試劑盒及小鼠受精方法。當(dāng)前小鼠體外受精的囊胚率較低，不利于依托小鼠胚胎的輔助生殖技術(shù)研究的展開。本發(fā)明提高囊胚率的小鼠精子體外培養(yǎng)試劑盒，包括a毫升的mHTF、b毫克的BSA、c微克的ERO1L重組蛋白和d微克的DPEP2重組蛋白。a:b:c:d＝2:20:1:2。ERO1L重組蛋白為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧化還原酶1類似蛋白，在DNA序列數(shù)據(jù)庫中的基因ID為50527。DPEP2重組蛋白為二肽酶?2，在DNA序列數(shù)據(jù)庫中的基因ID為319446。本發(fā)明在試劑盒中加入ERO1L重組蛋白和DPEP2重組蛋白，使得本發(fā)明能夠顯著提升精子活力和囊胚率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于培養(yǎng)試劑盒技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種提高小鼠精子活力及囊胚率的體外培養(yǎng)試劑盒及其使用方法。

背景技術(shù)

受精是精子與卵子相互結(jié)合而形成受精卵(合子)的過程，它標(biāo)志著新生命的開端。在此過程中，精子和卵子攜帶者分別來自父本和母本的遺傳物質(zhì)，精子和卵子的質(zhì)量決定著早期胚胎發(fā)育的成敗。目前，對于受精這一神秘的生物學(xué)事件的認(rèn)知大多來自體外受精的研究。然而，迄今為止，人類對受精的認(rèn)識尚未窮盡，還需要倚重體外受精技術(shù)來進一步研究受精機制。

小鼠模型是目前體外受精研究的重要手段，因此，受精科學(xué)研究需要使用、消耗大量的小鼠胚胎。然而，根據(jù)研究表明，現(xiàn)有小鼠胚胎的培養(yǎng)過程中，約有10％～25％的卵細(xì)胞由于受精失敗或是早期胚胎發(fā)育異常而被丟棄。傳統(tǒng)的用于小鼠體外受精的培養(yǎng)液主要是HTF液。上述培養(yǎng)液可以為精子提供了一個緩沖和供能環(huán)境，基本滿足體外受精技術(shù)的需求。但兩個突出的問題在于：1，對精子運動能力的改善不夠；2，受精后的合子發(fā)育成囊胚階段的比率(囊胚率)有待提高。因此，開發(fā)一種提高小鼠精子活力和囊胚率的培養(yǎng)體系就顯得尤為重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種提高小鼠精子活力及囊胚率的體外培養(yǎng)試劑盒及應(yīng)用。

本發(fā)明提高囊胚率的小鼠精子體外培養(yǎng)試劑盒，包括a毫升的mHTF、b毫克的BSA、c微克的ERO1L重組蛋白和d微克的DPEP2重組蛋白。a:b:c:d＝2:20:1:2。

ERO1L重組蛋白為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧化還原酶1類似蛋白，在美國國立生物技術(shù)信息中心建立的DNA序列數(shù)據(jù)庫中的基因ID為50527。DPEP2重組蛋白為二肽酶-2，在美國國立生物技術(shù)信息中心建立的DNA序列數(shù)據(jù)庫中的基因ID為319446。

進一步地，a＝10，b＝100，c＝5，d＝10。

該提高囊胚率的小鼠精子體外培養(yǎng)試劑盒的使用方法的具體步驟如下：

步驟一、將a毫升的mHTF、b毫克的BSA、c微克的ERO1L重組蛋白和d微克的DPEP2重組蛋白在37℃的環(huán)境下混合，并靜置30分鐘，得到小鼠精子培養(yǎng)液。a:b:c:d＝2:20:1:2。

步驟二、在小鼠精子培養(yǎng)液中吸取出精子獲能滴、受精滴、洗滴。

步驟三、取小鼠精子加入精子獲能滴中，并在37℃環(huán)境下培養(yǎng)90分鐘。

步驟四、用三滴洗滴依次洗滌小鼠卵細(xì)胞后，然后將小鼠卵細(xì)胞置入受精滴中。

步驟五、吸取5～15ul經(jīng)步驟三處理后含有精子的精子獲能滴，并添加到受精滴中，使得添加精子獲能滴后，受精滴內(nèi)的精子濃度為1×10⁶～5×10⁶/ml。

步驟六、將經(jīng)步驟五處理后含有精子獲能滴的受精滴放入培養(yǎng)箱受精4～5小時。

進一步地，一滴精子獲能滴的體積為150ul。一滴受精滴的體積為100ul。一滴洗滴的體積為50ul。

進一步地，所述的小鼠精子取自雄性8周齡、飼養(yǎng)環(huán)境為SPF級別的CD1小鼠體內(nèi)。