[發明專利]提高囊胚率的小鼠精子體外培養試劑盒及其使用方法

有效

• 申請號: 201811056268.1
• 申請日: 2018-09-11
• 公開（公告）號: CN109136172B
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 鄭波;于駿;李紅;吳亦波;沈聰;陳霞;楊慎敏
• 申請（專利權）人: 蘇州市立醫院
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073;C12N5/076
• 代理公司: 杭州君度專利代理事務所(特殊普通合伙) 33240
• 代理人: 黃前澤

1.提高囊胚率的小鼠精子體外培養試劑盒，包括a毫升的mHTF和b毫克的BSA，其特征在于：還包括c微克的ERO1L重組蛋白和d微克的DPEP2重組蛋白；a:b:c:d＝2:20:1:2；ERO1L重組蛋白為內質網氧化還原酶1類似蛋白，在美國國立生物技術信息中心建立的DNA序列數據庫中的基因ID為50527；DPEP2重組蛋白為二肽酶-2，在美國國立生物技術信息中心建立的DNA序列數據庫中的基因ID為319446。

2.根據權利要求1所述的提高囊胚率的小鼠精子體外培養試劑盒，其特征在于：a＝10，b＝100，c＝5，d＝10。

3.如權利要求1所述的提高囊胚率的小鼠精子體外培養試劑盒的使用方法，其特征在于：步驟一、將a毫升的mHTF、b毫克的BSA、c微克的ERO1L重組蛋白和d微克的DPEP2重組蛋白在37℃的環境下混合，并靜置30分鐘，得到小鼠精子培養液；a:b:c:d＝2:20:1:2；

步驟二、在小鼠精子培養液中吸取出精子獲能滴、受精滴、洗滴；

步驟三、取小鼠精子加入精子獲能滴中，并在37℃環境下培養90分鐘；

步驟四、用三滴洗滴依次洗滌小鼠卵細胞后，然后將小鼠卵細胞置入受精滴中；

步驟五、吸取經步驟三處理后含有精子的精子獲能滴，并添加到受精滴中，使得添加精子獲能滴后，受精滴內的精子濃度為1×10⁶～5×10⁶/mL；

步驟六、將經步驟五處理后含有精子獲能滴的受精滴放入培養箱受精4～5小時。

4.根據權利要求3所述的提高囊胚率的小鼠精子體外培養試劑盒的使用方法，其特征在于：一滴精子獲能滴的體積為150μL；一滴受精滴的體積為100μL；一滴洗滴的體積為50μL。

5.根據權利要求3所述的提高囊胚率的小鼠精子體外培養試劑盒的使用方法，其特征在于：所述的小鼠精子取自雄性8周齡、飼養環境為SPF級別的CD1小鼠體內。

6.根據權利要求3所述的提高囊胚率的小鼠精子體外培養試劑盒的使用方法，其特征在于：所述的小鼠卵細胞取自雌性8周齡、飼養環境為SPF級別的CD1小鼠體內。

7.根據權利要求3所述的提高囊胚率的小鼠精子體外培養試劑盒的使用方法，其特征在于：經步驟三操作后，精子獲能滴中的精子密度為7.7×10⁷～1.05×10⁸/mL。