[發(fā)明專利]一種集靶向、光熱于一體的紅細(xì)胞仿生型納米粒的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811055247.8
• 申請(qǐng)日: 2018-09-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109091673A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-12-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王秉;姚舒婷;單心怡;華稱祥;胡智文;萬(wàn)軍民
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江理工大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K41/00
• 分類號(hào): A61K41/00;A61K9/50;A61K9/107;A61K47/46;A61K47/34;A61K47/22;A61K47/36;A61K31/704;A61P35/00
• 代理公司: 嘉興永航專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33265
• 代理人: 蔣文

本發(fā)明涉及制藥領(lǐng)域，本發(fā)明提供了一種集靶向、光熱于一體的紅細(xì)胞仿生型納米粒的制備方法。本發(fā)明首先提取得到紅細(xì)胞膜，然后將吲哚菁綠負(fù)載在聚乳酸?羥基乙酸溶液上，將阿霉素包埋于上述體系，通過(guò)二次乳化?溶劑揮發(fā)法制得包埋有阿霉素的吲哚菁綠?聚乳酸?羥基乙酸納米溶液；之后通過(guò)將葉酸殼寡糖與阿霉素?吲哚菁綠?聚乳酸?羥基乙酸納米溶液反應(yīng)得到阿霉素?葉酸殼寡糖?吲哚菁綠?聚乳酸?羥基乙酸納米溶液；最后將阿霉素?葉酸殼寡糖?吲哚菁綠?聚乳酸?羥基乙酸擠壓進(jìn)入紅細(xì)胞膜，即可得到紅細(xì)胞仿生型納米粒。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及制藥領(lǐng)域，尤其涉及一種集靶向、光熱于一體的紅細(xì)胞仿生型納米粒的制備方法。

背景技術(shù)

癌癥（惡性腫瘤）是嚴(yán)重危害人類健康的難治疾病之一，每年都具有較高的發(fā)病率和死亡率。因此，對(duì)于腫瘤形成及治療方法的研究，目前己經(jīng)成為研究人員的研究重點(diǎn)和熱點(diǎn)。聚合物納米粒子由于其具有優(yōu)良的生物相容性和降解性、較高的載藥量和藥物遞送效率、良好的循環(huán)穩(wěn)定性等特點(diǎn)，因此，現(xiàn)如今聚合物納米粒子被廣泛應(yīng)用于藥物遞送系統(tǒng)。

然而傳統(tǒng)的納米粒容易與蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或其他生物分子粘附結(jié)合形成“蛋白質(zhì)環(huán)”從而影響它在體內(nèi)的行為，若與血清蛋白結(jié)合則會(huì)引起吞噬細(xì)胞的識(shí)別和吞噬，導(dǎo)致納米粒在血液中被快速清除，不但減弱其抗腫瘤效果，有些納米材料還具有潛在細(xì)胞或基因毒性。紅細(xì)胞膜作為新型納米遞藥載體具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，具有安全，生物兼容性高，體內(nèi)可降解等特點(diǎn)，最重要的是紅細(xì)胞膜上含有CD47蛋白，此蛋白與信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白-α（SIRP-α）受體作用可避免巨噬細(xì)胞的吞噬，基于這一點(diǎn)我們可將其應(yīng)用于抗腫瘤納米遞藥系統(tǒng)的研究。用紅細(xì)胞膜包裹抗腫瘤納米粒制作成為紅細(xì)胞仿生型納米粒，因?yàn)榧t細(xì)胞膜的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)紅細(xì)胞仿生型納米粒在體內(nèi)可逃脫免疫系統(tǒng)的監(jiān)視，避免被肝脾網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)清除，達(dá)到體內(nèi)長(zhǎng)循環(huán)效果，進(jìn)而可增加納米粒在腫瘤組織部位的蓄積，增強(qiáng)納米粒抗腫瘤效果。可以進(jìn)一步保護(hù)機(jī)體正常組織免受抗腫瘤藥物的損傷。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種集靶向、光熱于一體的紅細(xì)胞仿生型納米粒的制備方法。本發(fā)明首先提取得到紅細(xì)胞膜，然后將吲哚菁綠負(fù)載在聚乳酸-羥基乙酸溶液上，將阿霉素包埋于上述體系，通過(guò)二次乳化-溶劑揮發(fā)法制得包埋有阿霉素的吲哚菁綠-聚乳酸-羥基乙酸納米溶液；之后通過(guò)將葉酸殼寡糖與阿霉素-吲哚菁綠-聚乳酸-羥基乙酸納米溶液反應(yīng)得到阿霉素-葉酸殼寡糖-吲哚菁綠-聚乳酸-羥基乙酸納米溶液；最后將阿霉素-葉酸殼寡糖-吲哚菁綠-聚乳酸-羥基乙酸擠壓進(jìn)入紅細(xì)胞膜，即可得到紅細(xì)胞仿生型納米粒。

本發(fā)明的具體技術(shù)方案為：一種集靶向、光熱于一體的紅細(xì)胞仿生型納米粒的制備方法，包括以下步驟：

1)取6~8周大小的ICR小鼠數(shù)只，使用毛細(xì)管進(jìn)行眼球取血并在血中加入肝素抗凝，得到的全血在1-5℃，1500-2500 r/min下離心8-12 min后去除上層的血清和其他血細(xì)胞層，得到的紅細(xì)胞沉淀用冷處理后的1×PBS洗滌3~5次，備用。

在步驟1）中，加入肝素可以加強(qiáng)抗凝血酶滅活絲氨酸蛋白酶作用，阻止凝血酶的形成，并阻止血小板聚集等，從而阻止血液凝固；采用1×PBS洗滌紅細(xì)胞沉淀作用在于調(diào)整適宜的pH緩沖，保證生物活性物質(zhì)保持其最完整的特性。

2）向步驟1）得到的紅細(xì)胞沉淀中加入相當(dāng)于紅細(xì)胞沉淀55-65倍體積的冷處理后的0.25×PBS低滲2~3 h，接著在9000-11000 r/min下離心15~20 min，棄去上層液體，下層淡粉色的沉淀即為紅細(xì)胞膜，再用0.25×PBS反復(fù)洗滌3~5次使得提取的紅細(xì)胞膜更為純凈，備用。

在步驟2）中，采用0.25×PBS洗滌紅細(xì)胞膜作用在于調(diào)整適宜的pH緩沖，保證生物活性物質(zhì)保持其最完整的特性。