[發明專利]一種消化液、其制備方法及應用

有效

• 申請號: 201811055050.4
• 申請日: 2018-09-11
• 公開（公告）號: CN110885783B
• 公開（公告）日: 2022-05-24
• 發明（設計）人: 袁惟芯;張鈺;邵小燕;王春慧;趙雅寧;戴果鮮;張光輝;嚴小敏
• 申請（專利權）人: 上海賽傲生物技術有限公司;重慶國聯干細胞技術有限公司;北京賽傲生物技術有限公司;廣州賽傲生物技術有限公司;徐州細胞醫療有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 上海申浩律師事務所 31280
• 代理人: 沈其梅

本發明提供一種消化液，所述消化液組分包含：0.1％～0.5％膠原酶Ⅰ，0.1％～0.5％DispaseⅡ，63.47μg/ml～126.94μg/ml氯化鎂，其余為DMEM培養液；以上為重量百分比。本發明還提供該消化液的制備方法和應用。利用本發明消化液所得細胞具有產量高和活性高的特點，且具有快速、省時、操作性和可控性好等優勢。

技術領域

本發明屬于干細胞制備領域，具體的涉及一種組合物。

背景技術

脂肪干細胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)是近年來從脂肪組織中分離得到的一種具有多向分化潛能的干細胞。研究發現ADSCs適宜大規模培養，對機體損傷小等優點，而且其來源廣泛，體內儲備量大，適宜自體移植，逐漸成為近年來新的研究熱點之一。在脂肪干細胞培養中，通常使用膠原酶消化方法，但有關消化酶的濃度、消化時間及其他培養條件，每個實驗室使用的參數各不相同。例如，在2018年發表的文獻《Improved GMPcompliant approach to manipulate lipoaspirates,to cryopreserve stromalvascular fraction,and to expand adipose stem cells in xeno-free media》(Agostini et al.Stem Cell ResearchTherapy(2018)9:130)中，只使用一種膠原酶作為消化液，消化時間需要60分鐘。該方法每毫升得到的有核細胞數為：185.4±19.3×10³，得到的細胞存活率為：77.1±3.9％。

因此，本領域迫切需要開發出消化時間更短，效果更好的消化液，以探索脂肪干細胞培養最佳的條件，為大規模細胞培養和臨床應用提供方便。

發明內容

本發明提供一種消化時間短、效果更加好的消化液，以有利于大規模培養脂肪干細胞等細胞。

本發明第一方面，提供一種消化液，所述消化液組包含：

0.1％～0.5％膠原酶Ⅰ，

0.1％～0.5％DispaseⅡ，

1.5％～3％白蛋白，其余為DMEM培養液；

以上為重量百分比。

上述膠原酶Ⅰ的濃度為0.1％。

上述DispaseⅡ的濃度為0.1％。

上述消化液還包含63.47μg/ml～126.94μg/ml的氯化鎂。

上述氯化鎂的濃度為63.47μg/ml。

上述白蛋白的濃度為3％。

本發明第二方面同提供上述消化液的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括步驟：

(1)將適量膠原酶Ⅰ，DispaseⅡ分別完全溶解于生理鹽水或DMEM培養液中；

(2)按照上述百分比，將步驟(1)中溶解的各組分加入DMEM培養液中。

在具體實施例中，步驟(2)前還有一步驟：

將步驟(1)中溶解的膠原酶Ⅰ，DispaseⅡ按照需要比例混勻，并經0.22μm過濾器過濾。

本發明第三方面同提供上述消化液的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括步驟：

(1)將適量膠原酶Ⅰ，DispaseⅡ，氯化鎂分別完全溶解于生理鹽水或DMEM培養液中；

(2)按照上述百分比，將步驟(1)中溶解的各組分加入DMEM培養液中。

在具體實施例中，步驟(2)前還有一步驟：