[發明專利]一種香蕉離體莖尖超低溫保存方法

在審

• 申請號: 201811054371.2
• 申請日: 2018-09-11
• 公開（公告）號: CN109221094A
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發明（設計）人: 陳曉玲;李俊慧;盧新雄;辛霞;張金梅;尹廣鵾;何娟娟
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院作物科學研究所
• 主分類號: A01N3/00
• 分類號: A01N3/00
• 代理公司: 重慶市信立達專利代理事務所(普通合伙) 50230
• 代理人: 包曉靜

本發明屬于香蕉低溫保存技術領域，公開了一種香蕉離體莖尖超低溫保存方法，將3.0～6.0cm高香蕉苗，在含0.4mol/L蔗糖培養基中預培養2d；室溫條件下，剝取帶1～2個葉原基的莖尖；莖尖經裝載液裝載后，用玻璃化溶液處理，在鋁箔條上做成小滴；液氮中保存至少1h，用1.2mol/L蔗糖培養液化凍和洗滌，每次洗滌10min；將經上述處理的莖尖轉到含0.3mol/L蔗糖MS培養基，暗室培養2d，轉移到含0.5mg/L 6?BA的MS培養基中，培養30～35d，將恢復正常生長的種源接種到新的恢復生長培養基中進行增殖快繁，得叢生芽，生根培養基中培養。在液氮中長期保存，為香蕉種質的安全保存提供有效途徑。

技術領域

本發明屬于香蕉低溫保存技術領域，尤其涉及一種香蕉離體莖尖超低溫保存方法。

背景技術

香蕉是芭蕉科芭蕉屬植物，熱帶地區廣泛種植。香蕉味香、富含營養，植株為大型草本，從根狀莖發出，由葉鞘下部形成高3～6公尺(10～20尺)的假桿；葉長圓形至橢圓形，有的長達3～3.5公尺(10～11.5尺)，寬65公分(26寸)，10～20枚簇生莖頂。穗狀花序下垂，由假桿頂端抽出，花多數，淡黃色；果序彎垂，結果10～20串，約50～150個。植株結果后枯死，由根狀莖長出的吸根繼續繁殖，每一根株可活多年。原產亞洲東南部，臺灣、海南、廣東、廣西等均有栽培。目前我國香蕉資源保存主要采取田間保存結合離體試管苗保存，人力、物力和財力耗費比較大。而且田間保存易受到自然災害、病蟲害、混雜等影響；試管苗保存需要不斷繼代，易發生污染丟失和種質退化現象。超低溫保存可以實現對香蕉種質的長期保存且遺傳穩定性較高，是香蕉種質保存較為理想的途徑。

綜上所述，現有技術存在的問題是：目前我國香蕉資源保存主要采取田間保存結合離體試管苗保存，人力、物力和財力耗費比較大。而且田間保存易受到自然災害、病蟲害、混雜等影響；試管苗保存需要不斷繼代，易發生污染丟失和種質退化現象。超低溫保存可以實現對香蕉種質的長期保存且遺傳穩定性較高，是香蕉種質保存較為理想的途徑。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供了一種香蕉離體莖尖超低溫保存方法。

本發明是這樣實現的，一種香蕉離體莖尖超低溫保存方法包括：

步驟一：將3.0～6.0cm高的香蕉苗，在含0.4mol/L蔗糖培養基中預培養2d；

步驟二：在室溫條件下，剝取帶1～2個葉原基的莖尖；

步驟三：將莖尖經裝載液裝載30～60min后，利用玻璃化溶液(PVS2)于0℃下處理50min；

步驟四：將莖尖轉入至滴有PVS2液滴的0.5cm寬,2cm長的鋁箔條上，然后在液氮中蘸一下后，迅速裝入盛滿液氮的冷凍管中，然后浸入液氮保存；

步驟五：在液氮中保存至少1h后，在1.2mol/L蔗糖培養液中化凍；

步驟六：利用1.2mol/L蔗糖培養液洗滌2次，每次10min；

步驟七：將經過上述處理的莖尖，轉入到含0.3mol/L蔗糖的MS培養基，暗室培養2d，轉移到含0.5mg/L 6-BA的MS培養基中，恢復培養30～35d，將恢復正常生長的種源接種到新的恢復生長培養基中進行增殖快繁，獲得叢生芽；

步驟八：將叢生芽切成單芽，生根培養基中培養，獲得試管苗，備用。

進一步，步驟二中，室溫條件為25℃；

進一步，步驟二中，莖尖的長度為1.0～1.5mm；

進一步，步驟三中，裝載液為MS+2mol/L甘油+0.4mol/L蔗糖；

進一步，步驟五中，液氮中保存，至少需要保存1h；

進一步，步驟八中，生根培養的具體步驟為：