[發明專利]一種香蕉離體莖尖超低溫保存方法在審
| 申請號： | 201811054371.2 | 申請日： | 2018-09-11 |
| 公開（公告）號： | CN109221094A | 公開（公告）日： | 2019-01-18 |
| 發明（設計）人： | 陳曉玲;李俊慧;盧新雄;辛霞;張金梅;尹廣鵾;何娟娟 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院作物科學研究所 |
| 主分類號： | A01N3/00 | 分類號： | A01N3/00 |
| 代理公司： | 重慶市信立達專利代理事務所(普通合伙) 50230 | 代理人： | 包曉靜 |
| 地址： | 100081 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 香蕉 莖尖 超低溫保存 離體莖尖 液氮 保存 洗滌 恢復生長培養基 玻璃化溶液 生根培養基 蔗糖培養基 蔗糖培養液 暗室培養 低溫保存 室溫條件 有效途徑 蔗糖 叢生芽 鋁箔條 香蕉苗 葉原基 預培養 裝載液 剝取 快繁 小滴 種源 增殖 種質 接種 裝載 生長 安全 | ||
1.一種香蕉離體莖尖超低溫保存方法，其特征在于，所述的香蕉離體莖尖超低溫保存方法包括：
步驟一：將3.0～6.0cm高的香蕉苗，在含0.4mol/L蔗糖培養基中預培養2d；
步驟二：在室溫條件下，剝取帶1～2個葉原基的莖尖；
步驟三：將莖尖經裝載液裝載30～60min后，利用玻璃化溶液PVS2于0℃下處理50min；
步驟四：將莖尖轉入至滴有PVS2液滴的0.5cm寬,2cm長的鋁箔條上，然后在液氮中蘸一下后，迅速裝入盛滿液氮的冷凍管中，然后浸入液氮保存；
步驟五：在液氮中保存至少1h后，在1.2mol/L蔗糖培養液中化凍；
步驟六：利用1.2mol/L蔗糖培養液洗滌2次，每次10min；
步驟七：將經過處理的莖尖，轉入到含0.3mol/L蔗糖的MS培養基，暗室培養2d，轉移到含0.5mg/L 6-BA的MS培養基中，恢復培養30～35d，將恢復正常生長的種源接種到新的恢復生長培養基中進行增殖快繁，獲得叢生芽；
步驟八：將叢生芽切成單芽，生根培養基中培養，獲得試管苗，備用。
2.如權利要求1所述的香蕉離體莖尖超低溫保存方法，其特征在于，所述室溫條件為25℃；
所述莖尖的長度為1.0～1.5mm；
所述裝載液為MS+2mol/L甘油+0.4mol/L蔗糖。
3.如權利要求1所述的香蕉離體莖尖超低溫保存方法，其特征在于，所述液氮中保存，至少需要保存1h。
4.如權利要求1所述的香蕉離體莖尖超低溫保存方法，其特征在于，所述生根培養的具體步驟為：
首先，將叢生芽切成單芽；其次，轉入生根培養基中生根培養，培養溫度25±2℃，光照度1500～2000lx，光照時間12～16小時/天，直至長成試管苗。
5.如權利要求1所述的香蕉離體莖尖超低溫保存方法，其特征在于，所述生根培養基為：每升培養基含有吲哚丁酸1.0～2.0mg、萘乙酸0.2～0.8mg、蔗糖20～30g、瓊脂6～7g，余量為MS，pH5.8。
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