[發明專利]基于AAV病毒的基因編輯表達盒

在審

• 申請號: 201811054096.4
• 申請日: 2018-09-11
• 公開（公告）號: CN110885818A
• 公開（公告）日: 2020-03-17
• 發明（設計）人: 褚貝貝;楊國宇;王江;劉忠虎;汪新建;鐘凱;魯維飛;郭豫杰
• 申請（專利權）人: 河南農業大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/864;C12N15/90
• 代理公司: 北京永新同創知識產權代理有限公司 11376
• 代理人: 程大軍;欒星明

本發明涉及基因編輯領域。具體而言，本發明涉及基于AAV病毒的基因編輯表達盒。更具體而言，本發明涉及基于AAV病毒的基因編輯表達盒，以及包括所述表達盒的載體和利用所述表達盒或載體的基因編輯方法。

技術領域

本發明涉及基因編輯領域。具體而言，本發明涉及基于AAV病毒的基因編輯表達盒。更具體而言，本發明涉及基于AAV病毒的基因編輯表達盒，以及包括所述表達盒的載體和利用所述表達盒或載體的基因編輯方法。

背景技術

成簇的規律間隔的短回文重復序列(Clustered regularly interspaced shortpalindromic repeats，CRISPR)及其相關蛋白9(CRISPR-associated proteins 9，Cas9)在基礎生物學研究、生物化學、農業、醫藥業等領域成為一種革命性的工具(Barrangou etal.,CRISPR provides acquired resistance against viruses in prokaryotes[J].Science,2007,315(5819):1709-1712；Doudna and Charpentier,Genome editing.Thenew frontier of genome engineering with CRISPR-Cas9[J].Science,2014,346(6213):1258096；Hsuet al.,Development and applications of CRISPR-Cas9forgenome engineering[J].Cell,2014,157(6):1262-1278；Van Der Oost et al.,Unravelling the structural and mechanistic basis of CRISPR-Cas systems[J].NatRev Microbiol,2014,12(7):479-492；Barrangou and Doudna,Applications of CRISPRtechnologies in research and beyond[J].Nat Biotechnol,2016,34(9):933-941.)。它設計簡單、操作便捷且成本較低，可用來切割或結合特定的DNA或RNA序列，逐漸成為基因編輯、基因調控、基因治療等技術的標準應用程序。2012年Doudna等將CRISPR RNA(crRNA)與反式激活crRNA(trans-activating crRNA，tracrRNA)連接并構建成單鏈向導RNA(singleguide RNA，sgRNA)載體，證實與Cas9一起可在體外切割DNA片段。只需要改變sgRNA中與目的基因互補的序列，就可以造成DNA雙鏈的斷裂(double-strand break，DSB)(Jinek etal.,A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterialimmunity[J].Science,2012,337(6096):816-821.)。斷開的DNA一般通過兩條途徑進行修復：主要是非同源末端連接(nonhomologous end joining，NHEJ)，造成斷開位置的隨機插入或缺失(Insertion or deletion，Indel)堿基(Lieber,The mechanism of double-strand DNA break repair by the nonhomologous DNA end-joining pathway[J].AnnuRev Biochem,2010,79:181-211.)從而形成移碼突變，進而造成基因敲除；另一條是同源重組修復途徑(homology directed repair，HDR)，可利用帶有同源臂的模板對切開位點進行特定修復(San Filippo et al.,Mechanism of eukaryotic homologous recombination[J].Annu Rev Biochem,2008,77:229-257.)，行使基因的插入、缺失、突變等功能。2013年Zhang團隊和Church團隊同時發表了將CRISPR/Cas9系統用于真核細胞中進行基因組編輯，在基因研究中具有里程碑式的意義(Cong et al.,Multiplex genome engineering usingCRISPR/Cas systems[J].Science,2013,339(6121):819-823；Mali P et al.,RNA-guidedhuman genome engineering via Cas9[J].Science,2013,339(6121):823-826.)。