[發明專利]一種用酶催化氧化TMB熒光光譜測定葡萄糖的方法

在審

• 申請號: 201811052044.3
• 申請日: 2018-09-10
• 公開（公告）號: CN109187469A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發明（設計）人: 蔣治良;姚東梅;李重寧;梁愛惠
• 申請（專利權）人: 廣西師范大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N21/78
• 代理公司: 桂林市華杰專利商標事務所有限責任公司 45112
• 代理人: 劉梅芳

本發明公開了一種用酶催化氧化TMB熒光光譜測定葡萄糖的方法，其特征是，包括如下步驟：（1）制備已知濃度的葡萄糖標準溶液體系，測定其380nm處的熒光峰強度值為F；（2）制備空白對照溶液體系，亦測定其熒光峰強度值為F₀；（3）計算ΔF=F?F₀；（4）以ΔF對葡萄糖的濃度做工作曲線；（5）制備被測樣品溶液，測定其熒光峰強度值為F_樣品，計算ΔF_樣品=F_樣品?F₀；（6）依據工作曲線，計算出被測樣品中的葡萄糖的濃度。這種方法采用酶催化氧化TMB生成具有熒光的產物，且以反應產物為熒光分子探針使得熒光峰強度與被測物的濃度呈線性關系，實現對目標物的定量測定，方法簡便、選擇性好、靈敏度高。

技術領域

本發明涉及分析化學領域，具體是一種用酶催化氧化TMB熒光光譜測定葡萄糖的方法。

背景技術

葡萄糖(glucose)是最重要的活細胞能量來源之一，在醫藥上常用作營養劑，其在生物醫藥方面應用非常廣泛，因此，檢測葡萄糖的含量具有重要的意義。目前，葡萄糖的檢測方法有比色法、電化學法、熒光法、化學發光法等方法。有文獻報道了現有技術有下面幾種方法：一種具有催化活性的多元素摻雜的碳點(ME-CDs)，該碳點被作為一個比色傳感器應用于葡萄糖的檢測，該方法線性范圍為0.20-2.50mmol/L、檢出限為0.06mmol/L，該方法特異性較好，但靈敏度低；用Pt納米簇材料，在H₂O₂存在的條件下，它可以催化氧化3,3',5,5'-四甲基聯苯二胺(TMB)顯色，可用于檢測0-400μmol/L葡萄糖，檢出限為0.28μmol/L，該方法將具有催化活性的銀納米粒子嵌入棉纖維中，建立了一個納米酶催化快速檢測葡萄糖的光度法；一種MoS₂/GO復合物用于檢測葡萄糖的含量，該方法線性范圍為0.83μmol/L-65nmol/L；以一種石墨烯-碳的氮化物(g-C₃N₄)/氧化鐵-銅的納米結構，用于非酶電化學測定0.6μmol/L-2.0mmol/L葡萄糖，檢出限為0.3μmol/L一個與定容結構相結合的射頻貼片(radiofrequency patch)生物傳感器用于監測葡萄糖含量，該方法線性范圍為50–600mg/dL、檢出限為15.22mg/dL；一種基于MnO₂-酚醛樹脂(PFR)的納米復合材料的熒光檢測策略，用于檢測血液中的葡萄糖含量，該方法可以同時檢測葡萄糖和H₂O₂，其線性范圍為5μmol/L-1mmol/L葡萄糖、檢出限為1.5μmol/L葡萄糖。用氨基苯硼酸固定的水溶性銀納米簇(AgNCs-a-APBA)，該新材料與AgNCs相比，熒光強度提高了10倍，利用熒光猝滅實驗可以精確的檢測到納摩爾級別的葡萄糖含量，該方法靈敏。迄今尚未見葡萄糖氧化酶(簡稱GOx)催化氧化3，3’，5，5’-四甲基聯苯胺(TMB)反應用于熒光定量檢測葡萄糖的報道。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術不足，而提供一種用酶催化氧化TMB熒光光譜測定葡萄糖的方法。這種方法采用葡萄糖氧化酶催化氧化TMB反應生成有熒光的產物，且以反應產物為熒光分子探針，熒光峰強度與被測物的濃度呈線性關系，實現對目標物的定量測定，這種方法簡便、快速、選擇性好、靈敏度高。

實現本發明目的的技術方案是：

一種用酶催化氧化TMB熒光光譜測定葡萄糖的方法，與現有技術不同的是，包括如下步驟：

(1)制備已知濃度的葡萄糖標準溶液體系：于不同的刻度試管中，依次加入1μL-40μL 500μmol/L葡萄糖標準溶液、10μL-50μL 0.11mg/mL葡萄糖氧化酶溶液、100μL-200μL0.02mol/L pH 7.4PBS緩沖溶液和50μL-150μL 0.5mmol/L TMB溶液，搖勻、于40℃水浴反應20min，冰水終止反應，用二次蒸餾水定容至1.5mL；