[發明專利]一種用酶催化氧化TMB熒光光譜測定葡萄糖的方法

在審

• 申請號: 201811052044.3
• 申請日: 2018-09-10
• 公開（公告）號: CN109187469A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發明（設計）人: 蔣治良;姚東梅;李重寧;梁愛惠
• 申請（專利權）人: 廣西師范大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N21/78
• 代理公司: 桂林市華杰專利商標事務所有限責任公司 45112
• 代理人: 劉梅芳

1.一種用酶催化氧化TMB熒光光譜測定葡萄糖的方法，其特征是，包括如下步驟：

(1)制備已知濃度的葡萄糖標準溶液體系：于不同的刻度試管中，依次加入1μL-40μL500μmol/L葡萄糖標準溶液、10μL-50μL 0.11mg/mL葡萄糖氧化酶溶液、100μL-200μL0.02mol/L pH 7.4PBS緩沖溶液和50μL-150μL 0.5mmol/L TMB溶液，搖勻、于40℃水浴反應20min，冰水終止反應，用二次蒸餾水定容至1.5mL；

(2)制備空白對照溶液體系：采用步驟(1)的方法不加葡萄糖標準溶液制備空白對照溶液體系；

(3)分別取按步驟(1)、(2)制備的葡萄糖標準溶液體系及空白對照溶液體系傾入石英比色皿中，在熒光光譜儀上，設定儀器參數以280nm為激發波長掃描獲得體系的熒光光譜，測定380nm處的熒光強度值為F，同時測定空白對照溶液體系的熒光強度值為F₀，計算ΔF＝F-F₀；

(4)依據ΔF對葡萄糖的濃度關系做工作曲線；

(5)依照步驟(1)的方法制備樣品溶液，其中加入的葡萄糖標準溶液替換為樣品溶液，并按步驟(3)的方法測定樣品溶液的熒光峰強度值為F_樣品，計算ΔF_樣品＝F_樣品-F₀；

(6)依據步驟(4)的工作曲線，計算出樣品溶液葡萄糖的含量。