[發明專利]用于檢測人MTHFR和MTRR基因多態性位點的特異性引物組、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201811050683.6
• 申請日: 2018-09-10
• 公開（公告）號: CN109055531A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 林志鏗;周曉光;李運濤;楊璐平;雷洋;王松林
• 申請（專利權）人: 廈門為正生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 廈門市新華專利商標代理有限公司 35203
• 代理人: 周學玲

本發明公開一種用于檢測人MTHFR和MTRR基因多態性位點的特異性引物組，所述引物組包括針對MTHFR(C677T)、MTHFR(A1298C)、MTRR(A66G)基因位點的特異性引物及探針；本發明還涉及一種用于檢測人MTHFR和MTRR基因多態性位點的試劑盒，所述試劑盒包括含有上述引物及探針的PCR反應液凍干粉(10×SSP buffer、dNTPs、MgCl2、Taq酶、海藻糖)，儲存條件為2?30℃避光保存。本發明還涉及一種用于檢測人MTHFR和MTRR基因多態性位點的檢測方法，該方法免去抽提DNA程序，直接采用微量全血擴增，用血量少，減少病人的痛苦；省時省力，并且大大減少經濟支出。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種用于檢測人MTHFR和MTRR基因多態性位點的特異性引物組、試劑盒及其檢測方法。

背景技術

葉酸是由喋啶、對氨基苯甲酸和谷氨酸殘基組成的一種水溶性B族維生素，為機體細胞生長和繁殖所必需的物質，其參與DNA、RNA、蛋白質等其他重要化合物的合成，在機體代謝過程中發揮重要的作用。人類如缺乏葉酸可引起巨紅細胞性貧血以及白細胞減少癥、可引起高同型半胱氨酸血癥等癥狀。葉酸對孕婦尤其重要，孕婦對葉酸的需求量比正常人高4倍，準備懷孕的婦女和孕婦如果出現葉酸的代謝障礙，便可導致胎兒發生開放性神經管缺陷(如無腦兒、脊柱裂)、唐氏綜合征(先天愚型)、先天性心臟病和唇腭裂等出生缺陷，還可以導致孕婦習慣性流產、胎兒宮內發育遲緩、早產及新生兒低體重，使妊娠期高血壓、先兆子癇和胎盤剝離的發生率增加。此外，葉酸增補不應僅僅局限在女性，男性補充葉酸有著同等重要的意義。科學研究證實男性體內缺乏葉酸，會導致精子質量降低，精液中精子攜帶的染色體數量異常，從而引起新生兒出生缺陷。因此，葉酸是人體在利用糖分和氨基酸時的必要物質，是機體細胞生長和繁殖所必須的物質。

葉酸缺乏會引起機體產生一系列癥狀，而引起葉酸缺乏的主要原因是：膳食中葉酸補充不足及遺傳體質導致葉酸利用能力不足。研究表明，影響葉酸利用能力的遺傳因素主要是MTHFR和MTRR基因多態性導致葉酸代謝通路障礙，使葉酸利用能力受到部分或完全抑制而引起。常見的影響葉酸利用能力的基因多態性位點包括MTHFR基因677位點的多態性(C677T)、1298位點的多態性(A1298C)以及MTRR基因66位點的多態性(A66G)。

在正常飲食的情況下，葉酸利用能力強發生葉酸缺乏的概率比利用能力弱的低。目前，研究者已根據MTHFR c.677C>T、c.1298A>C和MTRR c.66A>G的不同基因型組合將個體的葉酸利用能力分為不同風險等級，可分為未發現風險、低度風險、中度風險、高度風險四個級別。遺傳因素的差異導致了機體對葉酸利用能力的差異，葉酸增補應因人而異，增補過多或過少都不利于胎兒健康和孕婦健康。因此，通過基因檢測技術手段，對影響葉酸利用能力相關基因(MTHFR和MTRR基因)的多態性進行檢測，可以及早發現不同個體對葉酸的吸收利用水平，從而篩查出容易引起葉酸缺乏的高危人群，實現個性化增補葉酸，從而增強葉酸補充依從性，同時加強產前檢查，以降低新生兒出生缺陷風險。這是提高人口素質的有效措施之一，有著重要的優生學意義。

目前，常用的基因突變檢測方法包括：單鏈構象多態性分析、PCR-限制性片段長度多態性、熒光定量PCR、變性高效液相色譜、直接測序等。這些方法或者檢測能力有限，或者耗時費力，更重要的是，這些方法一方面，不能針對不同基因的多個突變位點同時進行高通量檢測；另一方面，目前檢測對象一般為基因組DNA，并且試劑盒都是以液體試劑為主，存在需要低于零度下保存等缺點。因此有必要建立一種高通量、低成本、快速簡便及易保存的葉酸代謝相關酶基因突變篩查方法，以實現臨床快速檢測和規模化篩查。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的第一個目的是提供一種可同時檢測人MTHFR(C677T)、MTHFR(A1298C)、MTRR(A66G)三個基因多態性位點的引物組。