[發(fā)明專利]一種用于擴(kuò)增日本鰻鱺干擾素相關(guān)因子的引物和制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811049120.5
• 申請(qǐng)日: 2018-09-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110129329A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-08-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁英;李想;黃文樹(shù);黃貝;徐繼松;翟少偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 集美大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/23
• 分類號(hào): C12N15/23;C12N15/11;C12N15/70;C07K14/57;C07K1/22
• 代理公司: 廈門(mén)市精誠(chéng)新創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 35218
• 代理人: 秦華

1.一種用于擴(kuò)增日本鰻鱺干擾素相關(guān)因子的引物，其特征在于，所述引物如SEQ IDNO:3和SEQ ID NO:4所示。

2.一種制備日本鰻鱺干擾素相關(guān)因子的方法，其特征在于，使用了權(quán)利要求1所述的引物。

3.如權(quán)利要求2所述制備日本鰻鱺干擾素相關(guān)因子的方法，其特征在于，包括如下步驟：

PCR擴(kuò)增日本鰻鱺干擾素相關(guān)因子：采用權(quán)利要求1所述的引物對(duì)；

重組質(zhì)粒pET32a-IFN-γrel的構(gòu)建：將所得去掉信號(hào)肽的日本鰻鱺干擾素相關(guān)因子開(kāi)放閱讀框ORF與表達(dá)載體pET32a重組得到重組質(zhì)粒pET32a-IFN-γrel；

原核表達(dá)載體誘導(dǎo)表達(dá)；

目的蛋白的變復(fù)性處理；

純化得到IFN-γrel重組蛋白。

4.如權(quán)利要求3所述制備日本鰻鱺干擾素相關(guān)因子的方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增日本鰻鱺干擾素相關(guān)因子步驟中的PCR擴(kuò)增的程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5min；94℃變性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，35個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min。

5.如權(quán)利要求3所述制備日本鰻鱺干擾素相關(guān)因子的方法，其特征在于，所述原核表達(dá)載體誘導(dǎo)表達(dá)步驟的誘導(dǎo)表達(dá)條件為加入IPTG終濃度為1.0mmol/L，在37℃誘導(dǎo)溫度下，對(duì)IFN-γrel蛋白表達(dá)工程菌誘導(dǎo)2-6h；優(yōu)選的，誘導(dǎo)6h。

6.如權(quán)利要求3所述制備日本鰻鱺干擾素相關(guān)因子的方法，其特征在于，所述目的蛋白的變復(fù)性處理步驟為采用尿素。

7.如權(quán)利要求3所述制備日本鰻鱺干擾素相關(guān)因子的方法，其特征在于，所述純化步驟采用HisPur^TMNi-NTA Spin Columns。

8.如權(quán)利要求7所述制備日本鰻鱺干擾素相關(guān)因子的方法，其特征在于，所述純化步驟中，純化使用的緩沖液的pH值為8.0，NaCl濃度為300mM。